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大疱性类天疱疮(BP)是一种表皮下自身免疫性水疱病,该病为皮肤科的重症疾病,具有较高的死亡率,早期诊断对降低死亡率,提高患者生存质量至关重要。该病的诊断依赖实验室检测方法,包括酶联免疫吸附法(ELISA)、盐裂间接免疫荧光法(SSS-IIF)、直接免疫荧光法(DIF)等。本研究主要探讨血清学检测方法在大疱性类天疱疮诊断中的评价与应用。第一部分针对大疱性类天疱疮实验室检测方法的回顾性研究目的 采用回顾性研究方法,比较三种实验室检查方法:ELISA、SSS-IIF、DIF在大疱性类天疱疮诊断中的评价与应用。方法 选取2017年1月-2018年9月在我院就诊并完成大疱性类天疱疮实验室检测的1189例患者(包括BP患者与非BP患者),统计他们的性别、年龄、主诉、现病史、临床诊断、实验室检测结果等数据,并计算三种实验室检测方法在大疱性类天疱疮诊断中的敏感性与特异性。结果 在1189例患者中264例患者临床诊断为大疱性类天疱疮,271例患者临床诊断为天疱疮,153例患者临床诊断为湿疹,223例患者临床诊断为其他皮肤病,包括结节性痒疹26例,丘疹性荨麻疹20例,扁平苔藓12例,药疹10例等,278例患者临床诊断为待诊。1189例患者完成ELISA检测,其中798例完成SSS-IIF检测、444例完成DIF检测。临床诊断为大疱性类天疱疮、天疱疮、湿疹、其他诊断、待诊等患者ELISA阳性率分别为98.1%、8.5%、5.3%、9%、6.1%。临床诊断为大疱性类天疱疮、天疱疮、湿疹、其他诊断、待诊等患者SSS-IIF阳性率分别为92.8%、0.5%、2%、2.1%、6.4%。临床诊断为大疱性类天疱疮、天疱疮、湿疹、其他诊断、待诊等患者DIF阳性率分别为68.9%、0%、6.9%、11.8%、15.8%。临床诊断为大疱性类天疱疮的患者实验室检测阳性率高,差距有统计学意义(P<0.05)。将798例患者纳入大疱性类天疱疮诊断标准,798例患者均完成ELISA、SSS-IIF检测,其中322例完成DIF检测。ELISA敏感性与特异性为95.8%(95%CI:91.5%-98%)、90.8%(95%CI:88.1%-93%);SSS-IIF敏感性与特异性为 98.9%(95%CI:95.8%-99.8%)、99.7%(95%CI:98.7%-99.9%);DIF 敏感性与特异性为68.8%(95%CI:58.4%-77.6%)、92.5%(95%CI:88%-95.4%)。结论 ELISA是一种便捷、快速的血清学诊断方法,但检查结果为弱阳性时,可出现假阳性,故需联用免疫荧光法辅助临床诊断。DIF是大疱性类天疱疮诊断的金标准,作为一种有创的检测方法临床开展受限,且实验结果受取材部位、取材方式、制片等因素影响。SSS-IIF在大疱性类天疱疮诊断中敏感性、特异性均高是一种可靠的血清学诊断方法。第二部分两种BP180 ELISA检测在大疱性类天疱疮诊断中的比较研究目的 评价两种BP180 ELISA检测在大疱性类天疱疮诊断中的价值方法 大疱性类天疱疮患者49例,非大疱性类天疱疮患者43例,比较两种BP180 ELISA检测结果。结果 MBL BP180 ELISA 检测敏感性、特异性为 100%(95%CI:90.9%-100%)、46.5%(95%CI:31.5%-62.2%)。欧蒙 BP180 ELISA 检测敏感性、特异性为91.8%(95%CI:79.5%-97.4%)、86%(95%CI:71.4%-94.2%)。MBL、欧蒙 BP180 ELISA检测AUC值分别为0.913、0.985。两种ELISA检测相关系数为0.868。结论 两种BP180 ELISA检测均可作为BP诊断的重要方法,并能够为临床提供定量、重复性好的数据,两种BP180 ELISA检测敏感性无差异,欧蒙BP180 ELISA检测特异性高。第三部分不同底物的盐裂间接免疫荧光法在大疱性类天疱疮中的应用目的 评价四种不同盐裂皮肤为底物的SSS-IIF在大疱性类天疱疮诊断中的价值方法 选取大疱性类天疱疮患者5例,1:10-1:320梯度稀释患者血清并分别与四种底物行SSS-IIF检测结果 1、2、4、5号患者所有稀释血清均可见IgG线状表皮侧沉积。3号患者1:10-1:160稀释血清可见IgG线状表皮侧沉积结论 四种不同底物行SSS-IIF检测均为有效诊断大疱性类天疱疮的实验方法,正常人腹部皮肤25摄氏度浸泡法分裂皮肤时间更短,操作更简便,有利于实验室开展本项检测