目的：建立人胰腺癌裸鼠原位移植瘤模型，观察胰腺癌瘤体生长及其淋巴管生成的动态过程，为进一步揭示胰腺癌淋巴管生成及其淋巴转移机制提供实验依据。　　方法：将表达绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein，GFP)的人胰腺癌细胞株BxPC-3-GFP接种于裸鼠右后下肢背侧皮下，待皮下瘤成瘤后，将皮下瘤组织块原位种植到裸鼠胰腺内，建立人胰腺癌裸鼠原位移植瘤模型20只。取10mg/ml的D2-40单克隆抗体0.6ml，加在碳酸盐缓冲液中透析过夜；将红色荧光染料四甲基异硫氰酸罗丹明B按每毫克抗体加入10μg的比例溶于二甲基亚砜中，取此溶液2ml，逐滴加入抗体溶液中，结合物经层析柱层析后，得到浓度为2.8mg/ml的D2-40荧光分子探针溶液。10只裸鼠原位移植后，采用IFLUOR-100荧光成像系统，每周动态观察原位肿瘤的生长情况(采用绿色荧光滤片)。待肿瘤直径达1.5～2.0cm时，将200μl探针通过尾静脉注射，分别于注射后1.5min，2h，6h，24h和48h，进行探针靶向淋巴管成像(采用红色荧光滤片)。4周后通过中线剖腹术显示裸鼠腹腔，并在荧光成像系统下详细观察肿瘤原发灶、周围脏器及腹部淋巴结转移等情况。留取原发肿瘤和肝、肾、脾、肺、腹部淋巴结，常规病理检查。使用IVIS LuminaXR荧光成像系统，采用红色荧光蛋白(Discosoma red fluorescent protein，DsRed)滤光片组合，探索探针靶向淋巴管成像，同时，采用GFP滤光片组合行肿瘤GFP荧光成像。初次预实验，4只裸鼠分别尾静脉注射100μl生理盐水、100μl探针、200μl探针、300μl探针，于注射后15min、1h、2h、4h、24h和48h成像；实验终点取出肿瘤，行DsRed荧光成像。肿瘤组织取下后行免疫组化检查。淋巴结-淋巴管-皮下瘤引流实验，将BxPC-3-GFP细胞接种于裸鼠双侧下腹部，待皮下瘤生长至0.5cm×0.5cm时，于裸鼠左侧腹股沟淋巴结内注射20μl探针，分别于注射后20min、1h、12h、24h行DsRed荧光成像。　　结果：胰腺癌裸鼠原位移植成瘤率为100％。10只荷瘤裸鼠中有7只于原位移植后19天，可在IFLUOR-100荧光成像系统下观察到原位肿瘤的绿色荧光，肿瘤平均体积0.54cm3，23天后全部可以在荧光成像系统下较清楚的看到肿瘤的大小，肿瘤平均体积2.50cm3，至28天时可见肿瘤显示明显绿色荧光，部分肿瘤周围腹部见显示绿色荧光的结节灶，肿瘤平均体积3.46cm3。开腹荧光成像，整个肿瘤发出强烈绿色荧光，肿瘤与周围组织关系清晰可见，7只裸鼠肿瘤周围腹部出现显示绿色荧光的大小不一的淋巴结，肝、肺、肾、脾均未见明显荧光灶。探针靶向淋巴管成像，各时间点肿瘤均未见明显红色荧光出现。IFLUOR-100荧光成像系统下所见原发与转移灶均经病理证实，淋巴结转移率为70％。采用ⅣISLumina XR荧光成像系统，初次预实验，探针靶向淋巴管DsRed荧光成像，对照鼠出现DsRed假阳性信号，其他探针鼠只见鼠尾注药后残留的探针信号，肿瘤始终未见探针信号；对肿瘤标本行DsRed荧光成像，探针鼠肿瘤内检测到探针信号，对照鼠肿瘤内无信号。免疫组化证实D2-40探针进入肿瘤内并与淋巴管结合。淋巴结-淋巴管-皮下瘤引流实验中，DsRed荧光成像，注射点处探针信号明显，而各时间点均未探测到肿瘤内的探针信号。实验过程中，肿瘤GFP荧光成像均可较好地显示肿瘤的GFP信号。　　结论：活体荧光成像可以在体外无创、动态观察GFP标记的胰腺癌裸鼠原位移植瘤模型的发生、发展，但对解剖细节及深部转移显示欠佳；开腹荧光成像解剖清晰，显示转移、侵犯等细节清楚，但不能动态观察；D2-40荧光分子探针能进入肿瘤并结合淋巴管，但信号弱，活体不能显像，靶向胰腺癌淋巴管活体荧光成像有待于进一步研究。　　目的：探讨靶向血管内皮生长因子C(VEGF-C)的短发夹RNA(shRNA)对裸鼠原位胰腺癌生长、淋巴管生成及转移的作用，并与吉西他滨作对照研究。　　方法：将绿色荧光蛋白转染人胰腺癌细胞株BxPC-3。构建人胰腺癌裸鼠原位移植瘤模型32只，在原位移植后第16天，随机分为生理盐水对照组、吉西他滨组、VEGF-C shRNA静脉注射组(Ⅳ-shRNA)和VEGF-C shRNA瘤内注射组(IT-shRNA)，每组8只。吉西他滨用量为150 mg/kg体重，每周腹腔注射1次，共2周，VEGF-CshRNA质粒剂量为150μ g/kg体重，每周尾静脉或瘤内给药2次，共2周，对照组给予腹腔、尾静脉和瘤内注射相应等剂量生理盐水。实验过程中，每周2次称量荷瘤裸鼠的体重，并在IFLUOR-100小动物活体荧光影像系统下对裸鼠行整体荧光成像，使用荧光影像分析软件计算肿瘤的体积。实验终点颈椎脱臼法处死裸鼠，中线剖腹术显示裸鼠腹腔，进行开腹荧光成像，记录腹部出现转移淋巴结的数量。留取肿瘤组织，称瘤重，并计算抑瘤率和净体重。应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法和酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测肿瘤组织VEGF-C基因和蛋白表达的变化。应用免疫组织化学方法，分别以D2-40单克隆抗体标记肿瘤淋巴管、CD31单克隆抗体标记肿瘤血管、Ki67单克隆抗体标记增殖细胞，计算肿瘤组织微淋巴管密度(MLVD)、微血管密度(MVD)和细胞增殖率。　　结果：吉西他滨组、Ⅳ-shRNA组、IT-shRNA组抑瘤率分别为67.06％、35.09%、40.74%，与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)，Ⅳ/IT-shRNA两组抑瘤率明显低于吉西他滨组(P<0.05)。与对照组净体重(24.00g±2.32g)比较，IV/IT-shRNA两组净体重(22.50g±2.20g、22.71g±1.11g)差异无显著意义(P>0.05)，吉西他滨组净体重(20.16g±2.15g)明显降低(P<0.01)。吉西他滨组、Ⅳ-shRNA组、IT-shRNA组裸鼠腹部淋巴结转移数分别为2.25±1.29个、4.13±2.18个、3.38±1.41个，与对照组(4.38±1.57个)相比有降低趋势，但各组间差异无显著意义(P>0.05)。Ⅳ/IT-shRNA两组VEGF-C mRNA表达量相对值分别为0.52±0.02、0.75±0.03，明显低于对照组(3.81±0.07)和吉西他滨组(1.02±0.07)(P<0.01)。吉西他滨组、Ⅳ-shRNA组、IT-shRNA组的肿瘤组织中VEGF-C蛋白含量分别为10.01pg/mg±2.40pg/mg、7.93 pg/mg±0.74pg/mg、12.41 pg/mg±3.99pg/mg，与对照组(14.90pg/mg±8.36pg/mg)相比，差异无显著意义(P>0.05)，但三组肿瘤的VEGF-C蛋白含量降低的趋势与PCR结果基本一致。Ⅳ/IT-shRNA两组MLVD分别为5.33±5.52、6.71±6.21，与对照组(22.92±8.42)和吉西他滨组(13.13±6.81)相比，差异有显著性意义(P<0.01)。吉西他滨组MVD(9.29±9.88)明显低于对照组(28.21±11.03)(P<0.05)，Ⅳ/IT-shRNA两组MVD(22.37±13.63、22.15±11.13)与对照组比较，差异无显著意义(P>0.05)。吉西他滨组、Ⅳ-shRNA组、IT-shRNA组的细胞增殖率分别为1.52％±1.77％、12.09％±4.91％、22.47％±3.88％，与对照组(30.71％±5.65％)相比，差异均有显著意义(P<0.01)。　　结论：VEGF-C shRNA能明显抑制裸鼠原位胰腺癌中VEGF-C基因的表达和淋巴管生成，并有效抑制肿瘤生长，对淋巴结转移有部分的抑制作用。