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目的：观察富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP)对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells, hPDLSCs)膜片的生物活性的影响,比较经PRP刺激和未经PRP刺激的两组hPDLSCs膜片的牙周组织再生能力的差异,为更好的促进牙周组织再生治疗提供依据。方法：1、hPDLSCs的获取及体外培养,并用单克隆法和流式细胞术检测细胞增殖能力和是否来源间充质干细胞。2、在培养液里加入30μg/ml维生素C(Vitamin C,Vc)制备hPDLSCs膜片。3、抽取三位志愿者全血共300ml,经两次离心(2000r/min,7min和2900r/min,10min)后得到PRP,调节血小板浓度为1000×109/L左右,-80℃保存备用。4、分别用0%、0.5%、1%和5%浓度的PRP刺激hPDLSCs膜片,并成骨诱导后用苏木伊红(Hematoxylin and Eosin, HE)染色比较四组细胞膜片的细胞层数及密度,茜素红染色(Alizarin red staining)观察四组细胞膜片的成骨能力,并用扫描电镜观察四组hPDLSCs膜片细胞间连接及细胞外基质的量。5、提取四组膜片的基因和全蛋白,分别通过实时定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白印迹技术(Western Blot)比较各组hPDLSCs膜片的再生能力,选取最佳刺激浓度的PRP。6、用最佳浓度PRP刺激hPDLSCs膜片成骨诱导后包裹羟基磷灰石移植到裸鼠皮下,8周后取材。结果：1、第三代hPDLSCs单克隆形成实验结果显示,hPDLSCs贴着培养皿生长并形成了多个细胞集落。流式细胞术结果提示hPDLSCs具有良好的干性。2、经30μg/ml Vc刺激14天后可看到hPDLSCs汇合生长,用镊子沿着培养皿边缘刮一圈,可以将整个膜片从培养板上轻松的分离。3、HE染色结果表明,0.5%、1%PRP刺激的hPDLSCs膜片组细胞层数和密度都大于对照组,1%PRP组比0.5%组细胞层数和密度大,但5%PRP刺激的hPDLSCs膜片组与对照组没有明显差别,茜素红染色结果表明0.5%、1%PRP刺激的hPDLSCs膜片组比对照组有更的成骨结节形成,而1%PRP组比0.5%组的成骨能力更强,但5%PRP刺激的hPDLSCs膜片组与对照组没有明显差别。扫描电镜结果显示1%PRP-hPDLSCs膜片组比其他组有较多的胶原纤维和细胞外基质。4、RT-PCR检测结果发现用1%PRP刺激的hPDLSCs膜片成骨基因—Runx-2、ALP、OCN表达量均高于其他两组及对照组,经统计学分析P<0.05,5%PRP组有抑制成骨基因表达的趋势,相应的成骨蛋白表达与基因表达结果吻合,结果提示1%PRP是促进hPDLSCs膜片牙周再生能力的最佳浓度。5、裸鼠体内结果显示1%PRP-hPDLSCs膜片组比对照组的细胞量和纤维组织再生明显要多。结论：1.PRP能促进hPDLSCs膜片的牙周组织再生能力,且1%浓度的PRP促进牙周组织再生能力最强,5%浓度PRP则有抑制其作用的趋势。2.体内结果显示1%PRP能促进牙周组织再生。3.研究表明最佳浓度PRP复合hPDLSCs膜片有促进牙周组织再生良好的临床应用前景。