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目的：葫芦素B（CuB）是从葫芦科植物中分离出的四环三萜类化合物，具有高度氧化性。近年研究发现，许多葫芦素与两面神激酶/信号转导子和转录激活子（Janus Kinase/signalTransducer and Activator of Transcription, JAK/STAT）通路有关，而STAT3信号通路与其关系最为密切。研究显示CuB能够通过抑制STAT3活化而发挥抗肿瘤效应。本研究的目的在于进一步探讨B16F10黑素瘤细胞中STAT3磷酸化与CuB抗肿瘤间的关系。方法：1.小鼠黑色素瘤高转移细胞株B16F10细胞置于含体积分数为10%胎牛血清、质量浓度为100mg/L青霉素和链霉素的RPMI-1640培养液中，于37℃及体积分数为5%CO2的湿化培养箱中培养。2. B16F10黑素瘤细胞在含有6.25μM、12.5μM、25μM、50μM、100μM、200μM的AG490中培养24h、48h，应用MTS法观察AG490对细胞增殖活力的影响，计算细胞生长抑制率和IC50，并选择合适的AG490工作浓度。3. CuB作用于B16F10黑素瘤细胞前，先用AG490预处理细胞2h。 B16F10黑色素瘤细胞分为对照组、AG490组、CuB组及AG490+CuB组，分别培养24h和48h后，利用MTS法进行细胞活性分析，全自动酶标仪测定490nm波长处A值，并计算药物对细胞存活率的影响。4.碘化丙锭（PI）染色法检测20μM AG490对不同浓度CuB处理的B16F10黑素瘤细胞细胞凋亡和细胞周期的影响。5.采用免疫印迹检测p-STAT3、STAT3以及MAPKs信号通路p-p38、p38、p-JNK、JNK蛋白的表达情况。6.碘化丙锭（PI）染色法检测40μM SP600125对不同浓度CuB处理的B16F10黑素瘤细胞细胞凋亡和细胞周期的影响。结果：1. AG490预处理B16F10黑素瘤细胞2h后，再加入不同浓度的CuB作用24和48h，细胞增值率较单独CuB处理组有明显下降（P <0.05），提示AG490预处理可增强CuB对B16F10细胞的抑制作用。2.细胞形态观察结果表明，AG490预处理对葫芦素B诱导的黑素瘤细胞形态变化影响不大，但相对于CuB单独作用组，AG490与CuB联合作用组凋亡细胞相对较多，且AG490与低浓度的葫芦素B作用还会引起细胞体积轻微变大。3. CuB单独作用可明显影响B16F10黑素瘤细胞的周期分布。与对照组相比，CuB处理使G1期细胞显著减少，G2/M期细胞显著增加，形成四倍体细胞，并且低浓度药物诱导的四倍体细胞比率高于高浓度药物。AG490和CuB联合用药后，与CuB组细胞相比较，G1期细胞进一步减少，G2/M期阻滞更为明显，四倍体细胞的形成也明显减少。此外，AG490还可明显增加CuB诱导的凋亡峰比率（表2），两药联用表现协同作用。4.免疫印迹显示，CuB作用4h后，p-STAT3蛋白表达有轻微升高，24h后，p-STAT3蛋白表达明显上调。单独AG490不改变p-STAT3水平，但可明显降低CuB引起的p-STAT3水平，使p-STAT3/STAT3的比值从CuB组的0.86降低为AG490+CuB组的0.55，提示AG490对CuB诱导的STAT3活化能够起到明显的抑制作用。此外，免疫印迹还显示CuB可以引起p38活化，而AG490预处理对葫芦素B引起的p38活化有一定的影响。5.实验室先前的研究结果表明CuB也可引起JNK途径活化，而JNK特异性抑制剂SP600125可以完全阻断这一途径，尽管SP600125对STAT3磷酸化没有作用，但是SP600125与CuB联合作用却能够完全抑制CuB引起的STAT3磷酸化。6. CuB单独处理组的sub-G0/G1期细胞百分比为0.83±0.13%，而CuB与SP600125联合作用组的sub-G0/G1期细胞百分比与CuB单独处理组相比明显增多，分别为34.15±2.15%(1μM CuB和SP600125)、26.72±1.73%(10μM CuB和SP600125)。结论：1. CuB引起的STAT3磷酸化是一种代偿效应，其可以由JNK和Jak2途径共同介导。2. CuB通过激活STAT3使B16F10细胞对其产生一定的抗性，抑制STAT3的活化在一定程度上能阻断肿瘤细胞对CuB的抗性，促进CuB的抗肿瘤效应。