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目的：本实验拟运用RNA干扰技术靶向沉默HOXA10基因,观察对白血病细胞株体内外增殖及药物敏感性的影响。方法：1.分别采用Lipofectamine2000介导质粒载体、腺病毒和慢病毒三种方法转染U937细胞,通过比较3种方法对白血病细胞的转染效率及对细胞活力的影响,筛选出最佳的转染方法。2.设计并构建4条针对HOXA10基因的shRNA质粒表达载体,并构建HOXA10的过表达质粒,Western Blot外源筛靶检测出敲减效果最好的1条质粒并包装成慢病毒(lenti-shHOXA10),并用Real-Time PCR、Western Blot方法进行内源验证,观察RNA干扰对HOXA10基因的沉默作用；实验分3组：干扰敲除(knock down,KD)组、阴性对照(negative control,NC)组、空白对照(blank control,BC)组；瑞氏染色观察细胞形态上的变化；MTT法检测细胞增殖抑制率；流式细胞术检测细胞凋亡率。3.MTT法及流式细胞术检测U937细胞在转染前后对阿糖胞苷(cytarabine, Ara-c)、柔红霉素(daunorubicin,DNR)、长春新碱(Vincristine,VCR)药物敏感性的变化：计算各组细胞的IC50及凋亡率。4.通过流式细胞仪分选出干扰组和阴性对照组GFP阳性的细胞,建立裸鼠AML皮下移植瘤模型(细胞活力>90%),计算干扰组、阴性对照联合VCR组及干扰联合VCR组的抑瘤率。结果：1. Lipofectamine2000介导质粒载体转染组、腺病毒转染组GFP阳性细胞极少,流式细胞仪检测GFP阳性细胞均<4%；慢病毒转染组GFP阳性细胞约占90%。台盼蓝染色法显示腺病毒、慢病毒组活细胞率明显高于脂质体组,差异具有统计学意义(p<0.01)。2.成功构建了有效沉默HOXA10基因的慢病毒-shRNA载体。KD组HOXA10mRNA和蛋白的表达水平分别下降92.3%±1.3%和91.14%,KD组细胞抑制率和凋亡率分别为43.9%±0.7%、27.1%±1.4%,与NC,BC组相比差异有统计学意义(p<0.05)。瑞氏染色显示KD组细胞核质比减小、核分裂相少见。3.MTT和FCM结果表明：靶向降低HOXA10的表达水平可降低Ara-c、DNR,VCR对U937细胞的半数抑制浓度(half-inhibitory concentration,IC50),提高Ara-c、DNR、VCR作用下U937细胞的凋亡率,与对照组(NC、BC)相比差异具有显著性(p<0.05)。4.成功建立了裸鼠皮下移植瘤模型,与NC组相比,KD组的抑瘤率为26.55%；NC+VCR组的抑瘤率为39.86%;KD+VCR组的抑瘤率为87.87%,可见RNA干扰联合VCR的抑瘤率高RNA干扰和VCR的单独作用,二者可协同抑制U937细胞在裸鼠体内的生长。结论：1.慢病毒是转染U937细胞的合适载体。2.慢病毒载体介导的RNAi可稳定地降低HOXA10基因的表达水平,有效抑制U937细胞增殖和促进其凋亡。3. HOXA10基因沉默可增强U937细胞对阿糖胞苷(cytarabine,Ara-c)、柔红霉素(daunorubicin,DNR)、长春新碱(Vincristine,VCR)的敏感性。4.慢病毒载体介导的RNA干扰下调HOXA10的表达水平可在体内抑制U937细胞的增殖并增强U937细胞对VCR的敏感性。