Survivin原核高效、可溶性表达、纯化及其在肿瘤诊断中的应用研究

来源 :兰州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhaochunguang741
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目的:在E.coli中获取高效可溶性、高纯度的重组Survivin融合蛋白;建立基于Survivin重组融合蛋白的anti-Survivin的血清检测方法,为Survivin的深入研究及肿瘤的诊断奠定基础。 方法:通过氨苄青霉素抗性、PCR和重组质粒双酶切对重组质粒PET32-Survivin进行鉴定;将重组质粒PET32-Survivin转化BL21感受态细胞,通过氨苄青霉素抗性、PCR和PET32-Survivin重组质粒双酶切筛选重组子转化菌落,经DNA测序及BLAST比对确认Survivin基因序列正确性以及插入PET32质粒的位点和方向;IPTG诱导表达、Western blotting鉴定,镍离子金属螯合层析柱纯化重组融合蛋白;建立基于重组融合蛋白Survivin特异性抗体的检测方法,并对300份正常人血清、144份肿瘤患者血清进行了检测。 结果:Survivin DNA定向插入了pET32质粒:获得了高效、可溶性重组Survivin融合蛋白:建立了检测Survivin特异性抗体的间接LISA方法;Survivin及其抗体在肿瘤诊断中具有较高的价值。 结论:成功的获得了Survivin蛋白原核高效可溶性表达并进行高浓度纯化;建立了检测Survivin抗体的间接ELISA方法并进行了临床验证;Survivin蛋白在肿瘤诊断中具有较高特异性和应用价值;研究结果为Survivin作为肿瘤标志物的深入研究和肿瘤早期诊断奠定了重要基础。
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