背景与目的: 在肿瘤的治疗中,免疫疗法是继手术、放疗、化疗及内分泌治疗之外的又一大治疗模式。近年来免疫疗法的发展主要是将识别肿瘤细胞表面抗原的单克隆抗体及其工程抗体应用于临床治疗恶性肿瘤。乳腺癌相关抗原在乳腺癌诊治中主要有以下几方面的作用:原位癌的早期诊断,隐性转移癌的诊断,预测乳腺癌的播散范围及预后,制备相应抗体参与肿瘤的治疗等。因此,寻找特异性强,基因功能和生化机理明确的乳腺癌相关抗原对于乳腺癌的诊断治疗具有重要的意义。 我院前期制备的一株乳腺癌单克隆抗体(M4G3),经鉴定具有比较高的特异性,现已在乳腺病理的隐性乳腺癌鉴别诊断,及乳腺癌基础研究的定位显像中得到应用。此抗体的应用激发了我们探索其抗原分子机制的浓厚兴趣,该抗原的明确或许为乳腺癌的诊断与治疗提供一个新的靶点,为乳腺癌的发病机制研究提供一种新的思路,因此本研究旨在克隆其相应的乳腺癌抗原基因,明确其作用机制及抗体的作用靶点,为扩大此抗体在临床的应用提供理论基础。 方法: 第一部分:选取M4G3对应抗原高表达的乳腺癌细胞株构建λZap cDNA表达文库;以M4G3单抗筛选该文库获得阳性克隆,进一步亚克隆,对其进行序列分析及同源性比较,并利用软件对克隆基因进行定位。 第二部分:以克隆基因序列设计引物,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测乳腺癌细胞和组织中阳性克隆基因的表达,验证所获抗原基因的准确性;分别选用Western blot、免疫组化、免疫荧光等方法对克隆基因进行进一步验证和分析。