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目的:在冈田酸(okadaic acid,OA)诱导的阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)样大鼠模型上,观察钩吻素子(koumine)对AD样主要临床表现(学习记忆障碍)和特征性病理改变(老年斑和神经纤维缠结)的作用,明确钩吻素子抗AD作用,为钩吻素子可能用于临床防治AD提供动物学实验依据;探讨钩吻素子抗AD作用与海马淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)的表达量、小胶质细胞和星形胶质细胞活化情况、以及TNF-α和IL-1β表达量的关系,初步阐明钩吻素子抗AD作用的可能机制,为钩吻素子开发应用提供理论基础,并有助于加深对AD发病机制的认识。方法:⑴大鼠侧脑室多次注射OA建立AD样大鼠模型,末次侧脑室注射OA后的次日起,灌胃给予0.056、0.28或1.4 mg/kg钩吻素子盐酸盐溶液,一天一次,连续10天,采用Morris水迷宫法检测各组大鼠的定位航行及空间探索能力,观察钩吻素子对AD样大鼠学习记忆能力的影响;行为学实验结束后,取脑组织,采用Bielschowsky染色观察大鼠海马老年斑和神经纤维缠结形成情况,评价钩吻素子对AD样大鼠特征性病理变化的影响。⑵采用蛋白质分子印迹法测定海马淀粉样前体蛋白(amyloid precusor protein,APP)表达水平,分析钩吻素子抗AD作用与海马APP表达水平的关系。⑶采用免疫组织化学法观察海马小胶质细胞特征性标记物Iba-1和星形胶质细胞特征性标记物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫阳性反应情况,采用蛋白质分子印迹法测定海马Iba-1和GFAP的表达量,阐明钩吻素子抗AD作用与海马小胶质细胞和星形胶质细胞活化的关系。⑷采用蛋白质分子印迹法测定海马促炎细胞因子TNF-α和IL-1β表达量,探讨钩吻素子抗AD作用与海马促炎细胞因子TNF-α和IL-1β表达水平的关系。结果:⑴定向航行实验结果显示模型组大鼠逃避潜伏期显著高于对照组,空间探索实验结果显示模型组大鼠穿越原平台次数显著少于对照组,提示成功复制AD主要临床表现学习记忆障碍;与模型组相比,0.056-1.4 mg/kg钩吻素子可减少大鼠逃避潜伏期、增加穿越原平台次数,提示钩吻素子可能具有改善OA致AD样大鼠学习记忆障碍的作用。Bielschowsky染色结果显示模型组海马出现老年斑和神经纤维缠结,而钩吻素子处理组病变症状较轻,提示钩吻素子可能具有改善AD样典型病理变化的作用。⑵蛋白质分子印迹结果显示模型组海马APP表达量显著高于对照组,而钩吻素子处理组APP表达量显著低于模型组,该结果与空间探索实验结果呈负相关,提示钩吻素子抗AD作用可能与其抑制海马APP表达有关。⑶免疫组织化学结果显示模型组海马小胶质细胞特征性标记物Iba-1和星形胶质细胞特征性标记物GFAP免疫阳性反应较对照组强,而钩吻素子处理组有所减轻;蛋白质分子印迹结果显示模型组海马Iba-1和GFAP的表达量较对照组高,而钩吻素子处理组表达量较模型组低,该结果与空间探索实验结果呈负相关,提示钩吻素子抗AD作用可能与其抑制海马小胶质细胞和星形胶质细胞活化有关。⑷蛋白质分子印迹结果显示模型组海马促炎细胞因子TNF-α和IL-1β表达量较对照组高,而钩吻素子处理组表达量较模型组低,该结果与空间探索实验结果呈负相关,提示钩吻素子抗AD作用可能与其抑制海马TNF-α和IL-1β水平有关。结论:本文首次发现,1.钩吻素子具有改善实验性AD大鼠学习记忆障碍及海马组织病理改变的作用;2.钩吻素子抗AD作用可能与其抑制海马APP表达,减轻海马小胶质细胞和星形胶质细胞活化,降低海马促炎细胞因子TNF-α和IL-1β表达有关。