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研究目的：β2糖蛋白I (beta-2-glycoproteinI, β2GPI)与其相应抗体(抗β2GPI, anti-β2GPI)形成复合物,能够刺激血液单核细胞、血管内皮细胞活化,表达相关细胞因子,参与抗磷脂综合征(antiphospholipid syndrome, APS)的高凝状态和炎性反应,是其重要的病理机制之一。课题组前期研究揭示,在anti-β2GPI/β2GPI复合物刺激人单核细胞株THP-1表达组织因子(tissue factor, TF)的过程中,跨膜蛋白Toll样受体4(Toll-like receptor4, TLR4)及其下游信号转导分子能够被诱导表达并参与细胞的激活作用,并且部分依赖膜联蛋白Ⅱ (Annexin A2, ANX2),成为APS血栓形成的机制之一。本论文旨在前期研究基础上,以TF和肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor, TNF-a)为指标,探讨绿茶中重要的活性成分表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate, EGCG)以及他汀类之一的氟伐他汀能否抑制mti-β2GPI/β2GPI复合物介导的单核细胞株THP-1活化,其具体分子机制如何,为APS预防和治疗提供新的思路。研究方法：(1)利用实时定量PCR (Real-time quantitative PCR, RT-qPCR)检测anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞TF和TNF-α mRNA的表达,采用试剂盒检测TF活性,ELISA试剂盒检测TNF-a蛋白含量。(2)采用不同浓度的EGCG和氟伐他汀预处理THP-1细胞,MTT法观察对细胞增殖活力的影响。(3)观察不同浓度的EGCG和氟伐他汀对anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF和TNF-a的抑制作用,并检测其量效性和特异性。(4)运用RT-qPCR和Western blotting方法检测EGCG和氟伐他汀对anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导的THP-1细胞TLR4mRNA和蛋白表达的抑制作用。(5) Western blotting检测anti-β2GPI/β2GPI复合物刺激THP-1细胞有丝分裂原蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAPKs)与核因子κB (nuclear factor kappa B, NF-κB)的活化情况,并检测刺激的时效性。(6)采用不同浓度的EGCG和氟伐他汀预处理THP-1细胞,观察其对anti-β/β2GPI复合物诱导THP-1细胞MAPKs和NF-κB p65表达和磷酸化的干预作用,并检测其量效性。研究结果：(1) Anti-β2GPI/β2GPI复合物能够刺激THP-1细胞表达TF (mRNA及活性)和TNF-α (mRNA及蛋白),与对照组相比,差异显著(p<0.05)。(2)较低浓度的EGCG和氟伐他汀不影响THP-1细胞增殖活力。当EGCG浓度为100μg/ml,氟伐他汀浓度为50μg/ml时,可以显著抑制THP-1细胞增殖(p<0.05)。(3) EGCG和氟伐他汀抑制anti-β2GPI/β2GPI复合物对THP-1细胞TF和TNF-α表达的刺激效应,并呈现浓度依赖性。(4) Anti-β2GPI/β2GPI复合物刺激THP-1细胞后,TLR4表达增高；EGCG和氟伐他汀可以抑制anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导的THP-1细胞TLR4mRNA和蛋白表达。(5) Anti-β2GPI/β2GPI复合物刺激THP-1细胞表达TF和TNF-α,同时增加THP-1细胞MAPKs和NF-κB的磷酸化水平,并显示时间效应。EGCG和氟伐他汀显著抑制anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导的THP-1细胞MAPKs (ERK1/2、JNK、p38)和NF-κB的磷酸化(p<0.05),并呈现一定的浓度依赖性。结论：(1) Anti-β2GPI/β2GPI复合物能够刺激单核细胞THP-1活化,使细胞表达TF及TNF-α显著增加。(2) EGCG和氟伐他汀能抑制anti-β2GPI/β2GPI复合物对THP-1细胞TF和TNF-α表达的刺激效应。(3) EGCG和氟伐他汀干预anti-β2GPI/β2GPI复合物刺激的TLR4表达增强,以及MAPKs和NF-κB的磷酸化。(4) EGCG和氟伐他汀通过抑制TLR4-MAPKs-NF-κB信号通路,干预anti-β2GPI/β2GPI复合物对THP-1细胞的活化,提示可用于APS血栓形成的预防及治疗。