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胆道并发症(biliary complication,BC)占肝移植术后死亡原因的15%-34%,其更容易发生在活体和心脑死亡供体肝移植术后。近年来,国内外学者均致力于扩大供肝来源,包括“边缘”供肝的使用。然而,“边缘”供肝遭受缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)更为严重,术后原发性移植物失功(primary graft dysfunction,PGD)、功能延迟与缺血性胆道病变(Ischemic-type biliary lesion,ITBL)发生的风险显著增加。以往研究表明,缺血再灌注损伤、感染、免疫排斥反应等因素是导致移植肝胆道形态结构改变和功能受损的主要原因。IRI早期引起的胆管上皮细胞凋亡、胆道微循环障碍是肝移植术后发生胆道并发症的重要病因。在缺氧条件下,胆管上皮细胞有较强的抵抗杀伤细胞能力,再灌注之后,胆管上皮细胞明显受到杀伤细胞的攻击,且谷胱甘肽基础水平较低,氧自由基对胆管上皮细胞的毒性作用比对肝细胞的作用要强2.5倍。胆管组织损伤后再生能力低下,胆道缺血再灌注损伤导致肝移植术后胆道并发症,作为影响肝移植远期疗效的重要因素引起了临床和研究者的广泛重视。因此,避免或减轻供肝胆道缺血再灌注损伤是提高肝移植疗效和患者生存质量的关键。有关肝内外胆管缺血再灌注损伤的机理和防治方面的研究报道较少,文献报道Kupffer细胞抑制剂三氯化钆预处理对多种器官缺血再灌注损伤均有明显的保护作用,但对肝内外胆道系统的影响尚未明确。本研究通过建立大鼠自体肝移植模型,模拟临床肝移植过程,旨在观察三氯化钆对大鼠肝内外胆道系统缺血再灌注损伤早期胆管上皮细胞中Fas、FasL及Caspase-3表达的影响,探讨三氯化钆对胆道缺血再灌注损伤的保护作用,并对其机制作初步研究。目的：本文采用大鼠自体肝移植动物模型,模拟肝移植过程中肝脏经历缺血再灌注损伤的过程,观察三氯化钆预处理对移植肝胆道缺血再灌注损伤的保护作用,初步探讨三氯化钆的作用机制,为临床减轻胆道缺血再灌注损伤提供新思路、寻找新靶点。方法：1、参照周杰等介绍的方法,建立大鼠自体肝移植动物模型。2、SPF级健康雄性近交系Sprague-Dawley (SD)大鼠48只,体重200-250g,被随机分为三组：①假手术组(Sham group):大鼠术前24h经阴茎背静脉注射等体积生理盐水,仅接受麻醉、开腹、肝脏游离后常规关腹；②缺血再灌注组(IRIgroup):大鼠术前24h经阴茎背静脉注射等体积生理盐水,行自体原位肝移植,待冷灌洗结束门静脉复流后夹闭肝动脉30min,开放肝动脉血流后常规关腹。③三氯化钆预处理组(GdCl3+IRI group):大鼠术前24h经阴茎背静脉注射三氯化钆(10mg/Kg体重),行自体原位肝移植,待冷灌洗结束门静脉复流后夹闭肝动脉30min,开放肝动脉血流后常规关腹。3、各组分别于肝动脉复流后6h、12h处死动物,经腹主动脉采血5m1检测并比较各组肝功能(ALT、ALP、GGT、TBIL)变化,ELISA法检测血浆促炎性细胞因子TNF-α的含量及sFas水平。取新鲜肝脏及肝门部胆管组织,免疫组化染色法测定肝内外胆管上皮细胞中Fas、FasL蛋白表达情况。采用Western blot法测定肝门部胆管组织中FasL、caspase-3相关蛋白含量。透射电镜观察肝门部胆管上皮细胞及小叶间胆管上皮细胞超微结构,观察胆管上皮细胞线粒体受损情况以及胆管上皮细胞微绒毛覆盖情况。结果：1、建模情况：成功制作大鼠自体原位肝移植模型48例,模型手术成功率98%,手术时间为53.8+6.5min,无肝期为15.0±.8min。术后大鼠存活率100%。2、术后血ALT、ALP、GGT、TBIL水平：肝动脉复流后6h、12h分别经腹主动脉取血检测肝功能,与Sham组相比,IRI组和GdCl3+IRI组的血清ALT、ALP、 GGT、TBIL水平在各时相点均显著升高(P<0.05)；GdCl3+IRI组与IRI组相比较,GdCl3+IRI组的ALT、ALP、GGT、TBIL水平在各时相点均低于IRI组,差异有统计学意义(P<0.05)。3、术后血浆TNF-α和sFas水平：肝动脉复流6h、12h后,分别与Sham组比较,GdCl3+IRI组与IRI组血浆TNF-α水平在各时相点均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。肝动脉复流6h后,GdCl3+IRI组与IRI组血清TNF-α水平分别为162.3±12.6ng/L、210.4±15.1ng/L;肝动脉复流12h后,GdCl3+IRI组与IRI组血清TNF-α水平分别为191.2±14.5ng/L、243.3±18.4ng/L;术后两个时间点GdCl3+IRI组TNF-α水平均显著低于IRI组(P<0.05)。与Sham组比较,肝动脉复流6h、12h后GdCl3+IRI组与IRI组血清sFas水平在各时相点均明显增高(P<0.05),但术后两个时间点GdCl3+IRI组sFas水平分别为381.4±48.1ng/L、332.8±46.9ng/L,均高于相同时相点IRI组,差异有统计学意义(P<0.05)。4、免疫组化标记肝门部胆管上皮细胞及小叶间胆管上皮细胞中Fas、FasL的表达情况：与Sham组比较,GdCl3+IRI组与IRI组肝动脉复流6 h、12h时,肝门部胆管上皮细胞及小叶间胆管上皮细胞中Fas、FasL的表达量和表达强度显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。肝动脉复流6h, GdCl3+IRI组肝门部胆管上皮细胞中Fas、FasL阳性率分别为28.5%、22.8%,较同时相IRI组(39.5%、35.5%)均明显减少(P<0.05)。同期GdCl3+IRI组小叶间胆管上皮细胞中Fas、FasL阳性率分别为24.8%、19.6%,较IRI组(32.5%、28.5%)均明显减少(P<0.05)。肝动脉复流12h, GdCl3+IRI组肝门部胆管上皮细胞及小叶间胆管上皮细胞中Fas、FasL的表达量显著低于IRI组,差异有统计学意义(P<0.05)。5、Western blot法测定肝门部胆管组织中FasL、caspase-3相关蛋白含量：GdCl3+IRI组与IRI组肝动脉复流6h、12h时,与Sham组比较肝门部胆管上皮细胞中FasL、Caspase-3蛋白的表达量在各时相点均显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。肝动脉复流6 h, GdCl3+IRI组与IRI组肝门部胆管上皮细胞中FasL相对表达量分别为0.7±0.06、0.96+0.08,Caspase-3蛋白相对表达量分别为0.80±0.07、1.02±0.09, GdCl3+IRI组肝门部胆管上皮细胞中FasL、Caspase-3蛋白的相对表达量均显著低于IRI组,差异有统计学意义(P<0.05)。肝动脉复流12 h, GdCl3+IRI组与IRI组肝门部胆管上皮细胞中FasL相对表达量分别为0.69±0.06、0.87+0.07,Caspase-3蛋白相对表达量分别为0.71+0.06、1.16±0.10,GdCl3+IRI组肝门部胆管上皮细胞中FasL、Caspase-3蛋白的相对表达量均显著低于IRI组,差异有统计学意义(P<0.05)。6、胆管上皮细胞超微结构改变：在胆道组织病理学变化上,肝动脉复流后6h后透射电镜下观察见Sham组胆管上皮细胞结构正常,IRI组胆管上皮细胞水肿明显,表面微绒毛稀疏,线粒体肿胀明显或形成空泡,基质消失,嵴断裂、消失,可见细胞凋亡。GdCl3+IRI组胆管上皮细胞损伤程度较IRJ组明显减轻。结论：1、本模型模拟了肝移植的全过程,复制简单、重复性好、可比性强,且完全排除了免疫因素对胆道损伤的影响,能够更直接、更客观的观察冷缺血、相对热缺血及再灌注对胆道的损伤作用,是研究胆道IRI的理想模型。2、缺血再灌注损伤早期即可显著上调胆管上皮细胞凋亡相关基因Fas、FasL及Caspase-3表达。3、在胆道IRI早期,应用GdCl3预处理能明显下调胆管上皮细胞中促凋亡基因Fas/FasL蛋白的表达。4、GdCl3的保护机制可能与抑制枯否细胞活化、抑制氧化应激、维持线粒体结构和功能从而抑制内源性凋亡通路、以及抑制Fas/FasL过表达从而抑制外源性凋亡通路有关。