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目的：糖尿病视网膜病变(Diabetic retinophthy，DR)是糖尿病在眼部的主要并发症，为我国四大致盲眼病之一。DR的病理基础是微血管病变，研究其发生、发展的机理对预防和治疗这一疾病具有重要的临床意义。DR的形成涉及多因素、多环节，确切机制至今尚未清楚。随着细胞生物学和分子生物学技术的发展及其与临床研究的相结合，加深了对DR的认识。资料显示，DR的发生和发展与多种生长因子调控密切相关，而转化生长因子-β(Transforming growth factor-β，TGF-β)是一类能够调节细胞生长和分化的多肽，具有多种生物学作用。本研究选择转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)和转化生长因子-β2(7GF-β2)为研究对象，定量检测其在正常大鼠视网膜中的基因表达水平，探讨了GF-β1和TGF-β2在正常视网膜中表达的差异，为视网膜中基因的检测建立初步的技术平台；检测了GF-β2在不同时相点糖尿病大鼠视网膜中的基因表达情况，观察和分析TGF-β2的动态表达变化，探讨其在糖尿病视网膜病变发生、发展中的作用机制。 方法：1．选10w龄，正常雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠14只，分离视网膜，制备总RNA并逆转录。2．实时荧光PCR技术定量分析正常大鼠视网膜中TGF-β1和TGF-β2的mRNA含量。3．用链脲佐菌素(STZ)诱导SD大鼠建立糖尿病动物模型，血糖浓度大于16.7mmol／L定为糖尿病模型大鼠。4．上述糖尿病大鼠于第4、8、12、16、20、24w分别分离视网膜，液氮保存。5．应用RT-PCR技术检测糖尿病大鼠视网膜中不同时相点TGF-β2的基因表达。 结果：1．制备大鼠视网膜总RNA，甲醛变性凝胶电泳显示RNA样品完好无降第二军医大学硕士学位论文中文摘要解，能够用于基因表达分析。2.成功地进行了TGF一p基因表达的实时荧光定量RT-PCR检测，样品的复孔实时荧光值曲线大部分拟合良好，Ct值接近，定量PCR反应体系稳定，结果可靠。3.用STZ成功诱导建立了大鼠糖尿病动物模型。4.正常大鼠视网膜中TGF一pZ的mRNA转录丰度是TGF一pl的55倍左右。TGF一叩和TGF一pl的比值为5 5 .00士26.61，统计学上差异有显著性(P<0.ol)。5.与正常对照组相比，糖尿病组大鼠视网膜中TGF一pZ mRNA表达于4w时升高，但统计学上差异无显著性(P>0.05);sw时则下降，差异有显著性(尸<0 .05);12w时仍下降，差异有显著性(尸<0.05)，较sw时已出现上升趋势;16w时与正常对照组无明显差异(P>0.05);ZOw时则开始升高，但差异无显著性(P>0.05);24w时继续升高，差异有显著性(P<0.05)。结论:1.实时荧光定量PCR技术能够针对性地精确分析极少量组织细胞的基因表达，尤其适用于大鼠视网膜这样的微量组织标本的定量检测。2.TGF一p在正常视网膜中以TGF一pZ表达为主，提示TGF一解在视网膜正常生理功能中可能起主导作用。3.TGF一pZ的mRNA表达在糖尿病大鼠视网膜中较对照组于第sw、12w时明显降低，第24w时明显升高，可以看出TGF一叩随时间变化呈双相性。一方面说明TGF一p作为一种重要的细胞生长调节因子的双向调控特点，另一方面也说明TGF一pZ在DR中可能发挥着重要作用。