黄原胶降解菌Microbacterium sp. XT11差异蛋白质组分析

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenmojay
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黄原胶是一种高度稳定的多糖,不易被大多数微生物降解。本实验室分离的Microbacterium sp. XT11是一株性能优良的黄原胶降解菌株,能有效降解黄原胶并形成具有生物活性的寡糖物质。目前,生物法获得的黄原胶寡糖产品结构不均一、聚合度分散。由于黄原胶生物降解机制尚不清晰,阻碍了对生物法制备黄原胶寡糖的进一步优化、不利于黄原胶寡糖的工业化生产。为了阐明黄原胶微生物降解的分子机理,本研究中,首先应用三种消化策略来证明Microbacterium sp. XT11蛋白质组在黄原胶培养基和酵母培养基中的复杂性。然后通过LFQ(Label-free Quantitative)策略在黄原胶培养基和酵母培养基中的Microbacterium sp. XT11蛋白质组中筛选出黄原胶诱导的显着上调的蛋白质。研究结果表明,在黄原胶培养基和酵母培养基中的Microbacterium sp. XT11蛋白质组分别鉴定出2746和2792种蛋白质,占预测基因编码的总蛋白质数据集的80.6%和81.9%。在黄原胶培养基中特异性表达或上调的蛋白质的545种诱导蛋白质的列表中,有304种蛋白被注释为3类功能(分子功能,生物过程和细胞成分),并分布于28个亚组中。更重要的是,参与CAZy(carbohydrate-active enzymes)数据库的16种蛋白质和用转运蛋白活性注释的45种蛋白质被预测为黄原胶的降解途径中的关键蛋白。其中,四种CAZymes和两种ABC转运蛋白与本实验室前期XT11基因组分析获得的黄原胶降解基因簇元件一致。随后,从XT11差异蛋白组数据分析结果所显示的黄原胶培养条件下表达量显著上调的蛋白中选择了黄原胶寡糖结合蛋白Xan E(表达上调100倍)进行大肠杆菌的异源表达纯化,纯化得率达28.37%。随后,利用等离子表面共振技术(SPR)验证了Xan E结合黄原胶寡糖的能力。结果表明,参考的亲和力常数KD值为5.11×10-3 M,说明Xan E对黄原胶寡糖有一定结合能力,但结合能力较低,推测该结果是由底物不均一性导致的。本结果也证明了底物结合蛋白Xan E在XT11黄原胶生物降解产物转运途径中起着关键作用。本研究结果为挖掘黄原胶降解相关蛋白、解析黄原胶生物降解分子机理打下基础。
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