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以往研究显示：一氧化氮(NO)具有广泛的生物调节活性，可通过调节多种基因的表达，抑制肿瘤细胞的生长繁殖；自由基所致生物大分子的损伤可介导多种基因表达的改变。为进一步探讨自由基对肿瘤细胞生长繁殖的调控机制，通过研究光照核黄素、合成光核酸酶和L-精氨酸(L-arg)不同浓度对培养肿瘤细胞的生物学作用，探索了其对恶性肿瘤的抑制作用及机制。 一、L-精氨酸、光照核黄素及合成的光核酸酶浓度依赖性抑制肿瘤细胞生长繁殖 当培养肿瘤细胞系(Hela细胞)中加入中低浓度L-arg(0～30mmol／L)、核黄素(0.016 to32μmol／L)与光核酸酶(Br-Ph-ⅡP β Dp 0～205.2μmol／L，Br-Ph-PP β Dp 0～406.5μ mol／L)均能抑制肿瘤细胞的生长，其抑制率与药物浓度呈正相关；L-arg在较高浓度(30～100mmol／L各组)时对细胞的生长有促进的趋势，但其细胞形态发生明显变化，丧失贴壁能力； 二、光照核黄素可促进肿瘤细胞凋亡 经流式细胞仪检测核黄素给药组(32 μ mol／L，3.2 μ mol／L)与对照组(0μmol／L)凋亡指数(AI)依次为4.02，1.99，1.08，同MTT实验共同证明光照核黄素可诱发细胞凋亡； 三、光照核黄素可氧化DNA，产生8-羟基鸟嘌呤 采用8-羟基鸟嘌呤抗体免疫组化染色显示核黄素给药组(32μmol／L，3.2 μmol／L)细胞内有大量鸟嘌呤被氧化为8-羟基鸟嘌呤，且高剂硕士学位论文 量时出现膜、核阳性，低剂量时显示核阳性;四、光照时间与端粒的缩短呈正比在肿瘤细胞培养体系中，加入 核黄素，经不同光照时间后，采用经典方法Southem blot检测 端粒长度;发现端拉长度随给药后光照时间的延长而缩短，O， 0.5，l，2，4h光照后端粒长度分别约为4.61，4.36，4.10，3.92， 3 .79kb;五、光照核黄素可导致与DNA损伤相关多种基因的表达发生变化 由高通量DNA损伤芯片筛选受光照核黄素处理的肿瘤细胞 mRNA后，发现GADD45，53BPI，BRCAZ，BTGZ，P55ede， cEN甲一E，McAK，UNGZ等基因均有表达的改变，其中提高表 达的一些是与细胞周期及DNA损伤修复机制相关的基因的激 活，其中GADD45的提高表达可能提示GADD45在介导 Foxo3a修复DNA损伤前可能先激活p53或其它基因调节途 径，最终导致细胞的凋亡，抑制肿瘤细胞的生长. 总之，多种实验体系研究显示，自由基可抑制培养肿瘤细胞的生长繁殖，其机制可能与自由基损伤DNA导致多种基因表达异常及氧化切割缩短端粒有关。