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目的:1.制备人脂肪组织细胞外基质支架并初步检测其脱细胞效果、成分、机械性能等指标;2.探讨人脂肪组织细胞外基质支架对人脂肪间充质干细胞(hADSCs)的生物相容性及其对hADSCs成脂分化能力的影响;3.建立大鼠软组织缺损模型,探讨人脂肪组织细胞外基质支架于缺损软组织模型内生物降解性。方法:1.取正常脂肪组织约25g经反复冻融、酶消化、有机溶剂提取脂质、冷冻干燥等处理制备成人脂肪组织细胞外基质支架。大体观察支架性状,行HE、Masson染色、DAPI荧光染色观察支架脱细胞效果;免疫组织化学染色观察细胞外基质(Ⅳ型胶原蛋白、层粘连蛋白)保留情况;扫描电镜观察支架显微结构;万能力学试验机测试支架机械性能;2.利用酶消化法从人体健康脂肪组织中分离提取出hADSCs,扩增培养、观察细胞形态、检测细胞免疫表型;定向诱导hADSCs成脂及成骨分化,油红O、茜素红染色鉴定;取第3代hADSCs与人脂肪组织细胞外基质支架复合培养,CCK-8检测细胞增殖活性;扫描电镜观察细胞粘附情况并成脂诱导,14d后行细胞支架复合物冰冻切片,油红O染色,RT-PCR检测成脂特异性基因PPARγ、LPL mRNA表达情况;3.取清洁级雌性Wistar大鼠18只,于左侧背部切除竖脊肌部分肌肉,建立软组织缺损模型,分别于4w、8w、12w观察肌肉缺损愈合情况;另取清洁级雌性Wistar大鼠18只,于左侧背部建立软组织缺损模型,将支架植入其中;右侧直接将支架植入皮下;分别于4w、8w、12w取出植入支架,大体观察两侧支架降解情况,比较两组支架湿重,行HE染色观察支架内炎性浸润情况。结果:1.脂肪组织细胞外基质支架呈海绵样多孔结构;HE及Masson染色未见明显细胞结构,可见排列紧密的基质蛋白;DAPI荧光染色未见明显阳性细胞核,脱细胞彻底;免疫组织化学染色显示支架材料Ⅳ型胶原蛋白、层粘连蛋白染色呈阳性结果;扫描电镜观察支架呈多孔泡沫样结构,孔隙相互连接,孔径约50-60μm;万能力学试验机测定支架最大载荷值低于脂肪组织;2.胶原酶消化法可成功从脂肪组织中分离培养出hADSCs,细胞贴壁生长,原代呈短梭形,传代培养后呈长梭形;流式细胞仪检测免疫表型,其中CD44、CD90阳性,CD34、CD45阴性;hADSCs成脂、成骨定向诱导分化后,油红O、茜素红染色阳性。细胞与支架复合培养后,CCK-8检测显示A值随时间延长不断升高,细胞生长良好,基质支架对细胞无毒性;扫描电镜可见大量细胞粘附于支架;成脂诱导支架细胞复合物,油红O染色可见支架内大量红染脂滴;RT-PCR显示LPL、PPARγmRNA显著高表达;3.大鼠软组织缺损模型建立后,分别于4w、8w、12w观察可见软组织缺损持续存在,未能自行填充修复;将支架植入组织缺损及皮下后分别于4w、8w、12w取材,可见植入组织缺损处支架及皮下支架表面皆形成包膜,通过大体观察,比较湿重,可见缺损组支架降解明显快于皮下组,HE染色缺损组支架炎性浸润明显高于皮下组,两组支架均未完全降解。结论:1.利用脱细胞技术制备的人脂肪组织细胞外基质支架脱细胞彻底,具有良好的三维空间结构,细胞外基质成分保留完好,机械性能较正常脂肪组织有所下降;2.细胞在支架上增殖、粘附、分化良好,支架生物相容性能良好;3.大鼠软组织缺损模型建立有效,支架在体内生物降解性能良好。