甲烷氧化菌在果蔬保鲜中的应用

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甲烷氧化菌是以甲烷为唯一碳源和能源生长的微生物,它广泛存在于自然界中。甲烷单加氧酶(MMO)是甲烷氧化菌代谢过程中的重要酶系,它可以在分子氧的作用下催化甲烷氧化成甲醇;MMO还可以催化另外一种反应——烯烃环氧化反应,利用该反应可以将乙烯催化生成环氧乙烷。果蔬在储藏过程中会释放乙烯,能使果实呼吸强度大大提高,并能提高果实组织原生质对氧的渗透性,促进果实呼吸作用和有氧参与的其它生化过程,使果实中酶的活动性增强,从而大大缩短了果实的保质期。对于传统的化学和物理乙烯清除剂存在着有害物质残留,成本高不可反复利用等弊端,本论文研究内容主要包括提高甲烷氧化菌中MMO催化乙烯环氧化活性的探究和固定化细胞催化剂的制备以及和传统型乙烯清除剂的比较。通过改变培养条件来提高甲烷氧化菌中MMO催化乙烯生成环氧乙烷的能力,发现加入维生素B12对MMO催化乙烯环氧化活力的影响不大,而对MMO的生成量有促进作用,最佳添加量为8mg/L;加入外源电子给体甲酸钠可以较好的提高MMO催化乙烯的环氧活力,为环氧化反应提供还原当量使反应持续进行,最佳添加量为20mmo1/L;在对磷酸盐的研究中发现其只对甲烷氧化菌细胞的通透性有提高,可以适当增加MMO与乙烯的接触,来提高反应速率,最适添加量为10mmol/L。当三种物质在最适浓度共同作用MMO催化乙烯环氧化反应时,可以使MMO有最高的环氧化活性。将其固定到特定的载体上,制成固定化细胞催化剂,在对不同吸附载体的比较中,发现活性炭的吸附量优于其它载体,最适的添加吸附量为10g/100ml菌液,为了避免由于吸附时间过长,造成MMO失活,将刚达到吸附平衡时的固定化甲烷氧化菌取出,菌液冲洗后,进行二次培养来制得固定化细胞催化剂,单位载体的细胞吸附量可达8.75mg/g,MMO催化乙烯环氧化活性保留最佳,为固定前的67%,并对乙烯有较好的吸附作用,从而利用甲烷氧化菌生物催化清除果蔬在储藏过程中释放的乙烯。在和传统的物理化学吸附剂的比较中发现其对乙烯的清除能力没有显著差异,只是开始对乙烯的清除速率稍慢于高锰酸钾型乙烯清除剂,需要一定的浓度来启动反应。但对于传统的物理和化学乙烯清除剂,甲烷氧化菌型乙烯清除剂在反复使用,无有害物质残留成本低等方面有显著优势。
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