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第一部分、90K/Mac-2 BP在人脑星型细胞瘤中的表达 目的:分析90K/Mac-2 BP(Mac-2 binding protein)在人脑星型细胞瘤中的表达。 方法:RT-PCR检测90K mRNA在人脑星型细胞瘤以及正常脑组织中的表达;采用WB(Western blot)和免疫组化检测90K蛋白在人脑星型细胞瘤以及正常脑组织中的表达。 结果:RT-PCR发现90K mRNA在正常脑组织中微量表达，相对表达量为0.116±0.017;而在人脑星型细胞瘤中高表达，相对表达量为0.407±0.151，与正常脑组织相比有显著差异(t=6.065，P＜0.05)。低级别星型细胞瘤（WHOⅠ-Ⅱ级）与高级别星型细胞瘤(WHOⅢ-Ⅳ级)相对表达量分别为0.295±0.067和0.516±0.128，两组相比有显著差异(t=8.138，P＜0.05)。90K mRNA的表达与患者的性别、年龄以及肿瘤大小没有显著相关关系(P＞0.05)。Western blot结果显示在正常脑组织有少量的90K蛋白表达，而在星型细胞瘤中表达则显著升高。正常脑组织中90K蛋白相对表达量（90K IOD值/GAPDHIOD值）为0.291±0.064，星型细胞瘤中90K蛋白相对表达量为1.163±0.391，两组相比有显著差异(t=15.68，P＜0.05)。低级别星型细胞瘤中90K蛋白相对表达量为0.902±0.272，高级别星型细胞瘤中90K蛋白相对表达量为1.415±0.318，两组相比有显著差异(t=6.539，P＜0.05)。Western blot结果显示90K蛋白的表达与患者的性别、年龄以及肿瘤大小没有显著相关关系(P＞0.05)。免疫组化结果显示正常脑组织90K蛋白表达阳性率为10％(1/10)，星形细胞瘤90K蛋白表达阳性率为70.18％(40/57)，两组相比有显著的统计学差异(P＜0.05)。低级别星型细胞瘤中90K蛋白表达阳性率为53.57％(15/28)，高级别星型细胞瘤中90K蛋白表达阳性率为86.21％(25/29)，两组相比有显著的统计学差异(P＜0.05)。免疫组化结果显示90K蛋白的表达与患者的性别、年龄以及肿瘤大小没有显著相关关系(P＞0.05)。Spearman秩相关检验发现，90K蛋白的表达水平随着星型细胞瘤级别的升高而升高(r=0.786，P＜0.01)。 结论:90K mRNA与90K蛋白均在星形细胞瘤组织中高表达，在正常脑组织中微量表达;90K蛋白的表达水平与星形细胞瘤的恶性程度正相关;90K可能在星型细胞瘤的发生发展过程中发挥了重要作用。90K蛋白是星形细胞瘤相关抗原，在今后星形细胞瘤的免疫治疗中可能成为特异性的目标抗原。 第二部分、90K/Mac-2 BP负载的树突状细胞疫苗抗人脑星型细胞瘤的实验研究 目的:分析90K蛋白在DC疫苗抗星形细胞瘤免疫治疗中的作用。 方法:WB法检测90K蛋白在U251细胞中的表达;采用人外周血单核细胞分化培养DC;采用热凋亡法制备U251凋亡细胞，并与90K蛋白一起负载DC制备肿瘤疫苗;采用ELISA检测抗原负载DC和T淋巴细胞分泌的细胞因子;免疫磁珠法分选CD4+T细胞和CD8+T细胞;CCK-8法检测抗原负载DC诱导的T淋巴细胞增殖反应和CTL对U251细胞的杀伤作用。实验中抗原负载DC分为四组:未成熟DC组，成熟DC组，凋亡U251细胞-DC组和凋亡U251细胞+90K-DC组。 结果:WB法检测90K蛋白在U251细胞中的表达升高。培养成熟的DC在光镜和电镜下具有典型的树突样结构，流式细胞仪检测其细胞表面高表达CD80、CD86和HLA-DR。在44℃下加热3小时的U251细胞凋亡率最高，与DC细胞融合良好。四组DC疫苗中凋亡U251细胞+90K-DC分泌的IL-12p70浓度最高，而IL-10的浓度要稍低。抗原负载DC能够刺激T淋巴细胞增殖，四组中凋亡U251细胞+90K-DC组刺激T淋巴细胞增殖能力最强。免疫磁珠法分选的CD4+T细胞和CD8+T细胞具有很高的细胞纯度。抗原负载DC能够刺激CD4+T细胞分化为Th1细胞并分泌IFN-γ，四组中凋亡U251细胞+90K-DC组刺激CD4+T细胞分化为Th1细胞并分泌IFN-γ的浓度最高。抗原负载DC能够刺激CD8+T细胞活化为CTL细胞并分泌IFN-γ，四组中凋亡U251细胞+90K-DC组刺激CD8+T细胞活化为CTL细胞并分泌IFN-γ的浓度最高。抗原负载DC刺激CD8+T细胞活化为CTL后具有杀伤U251细胞作用，四组中凋亡U251细胞+90K-DC组刺激CD8+T细胞活化为CTL细胞杀伤U251细胞的作用最强。 结论:经过人外周静脉血中单核细胞分化而来的DC具有典型的形态特征和免疫表型，可为制备DC肿瘤疫苗提供可靠稳定的DC细胞来源。经过热凋亡U251细胞和90K蛋白共同负载的DC在体外能够诱导T淋巴细胞的增殖。免疫磁珠法分选的CD4+T细胞和CD8+T细胞具有很高的细胞纯度。热凋亡U251细胞和90K蛋白共同负载的DC疫苗能够诱导抗原特异性CTL杀伤U251细胞，其杀伤U251细胞的作用比单独应用热凋亡U251细胞负载的DC疫苗要强，显示90K蛋白的加入显著增强了DC疫苗的效果。热凋亡U251细胞和90K蛋白共同负载的DC疫苗通过胶质瘤相关抗原特异性免疫应答的非依赖途径和依赖途径共同发挥抗胶质瘤作用。