论文部分内容阅读
鸡坏死性肠炎(Necrotic enteritis,NE)是由A型或C型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)引起的以鸡肠道粘膜坏死,腹泻、血性下痢等为主要特征的疾病,致死率较高。该病常与鸡球虫病或球虫感染伴发,经济损失巨大。近年来该病的发病率和流行率在全球范围内呈升高的趋势。C.perfringens是革兰氏阳性厌氧芽孢杆菌,是一种肠道常在菌,当生长环境改变引起其大量增殖后,菌体附着于肠道粘膜并产生大量毒素和酶类导致肠道黏膜损伤,从而引起肠道疾病的发生。研究表明C.perfringens的致病性通常与毒素的大量产生和携带抗药性质粒有关。C.perfringens中普遍存在可接合转移的抗生素抗性质粒,并且随着饲料添加剂的大量使用,其抗药性越来越复杂。本研究应用等温微量热技术(Isothermal Microcalorimetry,IMC)技术,建立了鸡源C.perfringens抗药性及其抗药谱快速准确测定,并对我国不同地区鸡场所分离的52株A型C.perfringens进行了泛基因组分析,从泛基因组水平上探索我国鸡源C.perfringens中抗药性基因的分布状况及其群体多样性。为研究C.perfringens的致病机理和防治提供实验基础。1、鸡源C.perfringens菌株抗药性检测的IMC方法建立。以C.perfringens ATCC3624为参考菌株,分别加入不同浓度的6种兽医临床常用药物,连续监测加入用药物后C.perfringens培养中热量的变化曲线,建立起快速,实时定量检测C.perfringens抗药性的方法。并比较IMC和MIC法结果,表明两者确定的最小抑菌浓度(Mini-inhibitory Concentration,MICs)相同,证明IMC可以用于在体外检测细菌的生长以及不同抗生素的功能特性,克服了传统方法的一些局限性。2、为了解我国一些地区鸡源C.perfringens的抗药性基因携带和分布的情况,对部分鸡场采样得到的50株鸡源C.perfringens进行泛基因组测序,得到不同菌株之间的抗药性基因的携带情况,以及抗药性基因的转移情况。解决了C.perfringens的质粒提取效果不理想且没有可重复性的问题。目前发现的我国鸡源C.perfringens大多数是多重抗药的,携带的抗药性质粒主要有四环素类抗性基因、杆菌肽类抗性基因和大环内酯类抗性基因,为后续研究奠定了基础。