广西都安酿酒葡萄皮渣中化学成分的分离、活性分析及白藜芦醇的提纯工艺研究

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葡萄属于落叶藤本植物,是地球上最古老的植物之一,也是人类最早栽培的果树之一。我国种植葡萄的历史悠久,而对于将葡萄酿酒饮用,李时珍在《本草纲目》中早有记载。广西的野生毛葡萄是在喀斯特特殊的地理条件下自然生长的,资源丰富,研究价值显著。现代酿酒工艺中,往往将葡萄的皮渣除去,没有充分利用其中的有效化学成分。本论文对广西都安酿酒葡萄皮渣中的有效化学成分进行分析,并对其中的白藜芦醇的提纯工艺进行研究。主要分为以下几个方面:一、本文对95%乙醇浸泡过后的提取物分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,收集各部分所得浸膏,按极性从小到大分成四个部分。分别对羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基进行抗氧化活性实验,通过测得的自由基清除率反映各极性部分的抗氧化能力。其中,乙酸乙酯相和正丁醇相与VC或BHT的自由基清除能力相当,证明乙酸乙酯相和正丁醇相具有较好的抗氧化能力。再将四个极性部分分别与SGC-7901(人胃癌细胞)、HT-29(人结直肠腺癌细胞)、HeLa(人宫颈癌细胞)和PC-3(人前列腺癌细胞)四种肿瘤细胞进行毒性实验,通过测得IC50值反映各极性部分的抗癌活性。其中,石油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相对于SGC-7901的IC50值远远高于顺铂,但对于HT-29、HeLa和PC-3的IC50值比较接近顺铂,证明石油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相对HT-29、HeLa和PC-3有较好的抑制作用。二、对酿酒葡萄皮渣的石油醚相通过GC-MS检测其挥发性成分,再对石油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相进行一系列的分离。主要采用硅胶柱色谱进行分离,得到10个化合物,将TLC和重结晶作为辅助手段,同时通过IR、ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR等波谱鉴定了其中6个化合物的结构。分别为:β-谷甾醇、棕榈酸、对羟基苯甲酸、熊果酸、白藜芦醇、芦丁。三、对酿酒葡萄皮渣中的白藜芦醇分别用乙醇回流法、纤维素酶法、超声波法进行提取工艺研究,采用紫外分光光度法检测白藜芦醇的提取效果。实验中,针对影响不同提取方法的各个因素进行单因素实验,根据单因素实验结果,制定正交实验设计,了解乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间对乙醇回流法的影响;了解酶的用量、酶解温度、酶解时间、PH值对纤维素酶法的影响;了解乙醇浓度、料液比、超声时间、超声温度对超声波法的影响。得到了三种提取方法的最佳提取条件。在最佳提取条件下,乙醇回流法的最大提取率为0.0429%,纤维素酶法的最大提取率为0.0598%,超声波法的最大提取率为0.3125%。用超声波辅助提取酿酒葡萄皮渣中的白藜芦醇,分别用有机溶剂萃取法和双水相萃取法两种方法对白藜芦醇进行初步纯化,通过HPLC检测,经双水相萃取法纯化后白藜芦醇的含量13.3μg/mL,远远高于有机溶剂萃取法的2.342μg/mL。
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