【摘 要】
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目的:通过加入不同浓度的c-Jun氨基末端激酶(JNK)的特异性抑制剂SP600125,抑制JNK信号通路,探究成熟破骨细胞(OC)形成过程的相关调节作用。方法:分离培养SD大鼠牙囊细胞(DFCs
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目的:通过加入不同浓度的c-Jun氨基末端激酶(JNK)的特异性抑制剂SP600125,抑制JNK信号通路,探究成熟破骨细胞(OC)形成过程的相关调节作用。方法:分离培养SD大鼠牙囊细胞(DFCs),CCK-8检测0、5、10、15、20μmol/L浓度的JNK抑制剂SP600125对DFCs增殖活性的影响。分离培养C57小鼠的骨髓巨噬细胞(BMMs),将DFCs和BMMs按照一定比例建立共培养体系,0、5、10、15、20μmol/L浓度的抑制剂分别处理。72h后实时定量PCR检测DFCs中核因子κB受体活化剂配体(RANKL)、骨保护素(OPG)基因的表达量变化;7天和9天,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色后观察视野中OC的数量;9天后取出骨磨片,电镜扫描观察形成的骨陷窝形态面积及数量。结果:CCK-8结果:JNK抑制剂SP600125在0-20μmol/L浓度范围内对DFCs的增殖无显著影响(P﹥0.05)。PCR结果示:处理72h后,DFCs中的RANKL基因表达量下降,OPG上升,与对照组比较差异均有统计学意义(P﹤0.05),但在15μmol/L时RANKL表达量最弱,OPG最强表达。TRAP染色结果示:各组均有OC生成,染色明显,9d较7d产生的OC数显著增加,与对照组相比,加入抑制剂的各组中OC数减少,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。电镜扫描结果示:各实验分组均可见骨吸收陷窝,陷窝内可见胶原纤维,对照组形成骨陷窝明显多于处理组各组(P﹤0.05),其结果显示与染色和qRT-PCR一致。结论:在体外DFCs中,特异性抑制剂SP600125抑制JNK信号通路改变RANKL、OPG表达量,对破骨细胞的形成及活化具有一定的负向调控作用,提示JNK信号可影响牙齿萌出,对牙槽骨改建等破骨细胞相关性口腔疾病提供研究基础。
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