【摘 要】
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钒溴过氧化物酶(Vanadium bromoperoxidase, V-BPO)是海藻中含量比较丰富的一类卤素过氧化物酶。V-BPO具有良好的热稳定性,有机溶剂耐受性,能够催化多种反应,如烯烃的环氧化、
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钒溴过氧化物酶(Vanadium bromoperoxidase, V-BPO)是海藻中含量比较丰富的一类卤素过氧化物酶。V-BPO具有良好的热稳定性,有机溶剂耐受性,能够催化多种反应,如烯烃的环氧化、溴化反应,有机硫化物的氧化反应以及氨基酸氧化反应等,具有很好的工业应用价值。本文利用超滤膜从珊瑚藻中分离纯化V-BPO,对其酶学性质进行考察,并对V-BPO在两相酶膜反应器中发生的催化反应进行了研究。本文建立了一种利用超滤法分离纯化V-BPO的简便、高效新方法。利用聚偏氟乙烯超滤膜对珊瑚藻中的钒溴过氧化物酶(EC 1.11.1.18,分子量740 kDa)进行分离纯化。首先,向粗酶液中加入原钒酸钠使酶液中VO43-终浓度为1 mmol/L,经过热沉淀,然后用超滤膜进行超滤纯化,并对膜的截留分子量、操作压力、起始蛋白浓度、搅拌速率、pH值、离子强度等条件进行了优化。分离纯化后得到酶活回收率为96%,纯化倍数为21倍,比活力为212 U/mg的钒溴过氧化物酶,为来自商品(Sigma公司)提供来自珊瑚藻的V-BPO(比活力=100 U/mg)比活力的2.1倍。本方法具有收率高,步骤简单等优点。对分离纯化后的V-BPO酶学性质进行研究。该酶最适pH为6.0,亚基分子量为66 kDa。动力学研究表明,在室温(25℃),pH=6.0下,MCD,KBr,H2O2的Km值分别为3.74μmol/L,0.119 mmol/L,0.016 mmol/L。具有良好的H2O2耐受性,同时,钒离子和钙离子可以提高酶的活性和热稳定性。研究了纯化后的V-BPO在两相酶膜反应器中催化氧化环己烯反应体系的特征。以膜反应器代替传统的“一锅法”反应器,分别从固定化方法,膜孔径,反应温度,载酶量,底物浓度和重复使用性等方面进行研究,在最佳催化反应条件下获得环氧环己烷最终浓度为19.87 mmol/L。此反应体系避免了传统的“一锅法”多相反应体系给后继的产物分离带来的困难;实现了有机相和水相的自动分离,简化了工艺过程,为V-BPO在两相酶膜反应器中的初步应用提供一些参考。
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