金银花中物质提取、纯化及工艺研究

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金银花作为一种十分具有经济价值的中药材,目前已经形成一系列产业链,如药用、食用生产链等,一直是天然药物领域研究的热点。其主要化学成分为有机酸类、黄酮类和挥发油类等物质,一般认为金银花作为药用,其功效主要是显著的抗菌活性。现代药理学研究证明,金银花的抗菌成分为有机酸(主要为绿原酸)和黄酮类成分。目前金银花的研究主要集中于绿原酸的提取,近年来,作为金银花质量控制中重要参数的黄酮类物质的研究也日益受到人们的关注。与此同时,现代材料科学、统计科学和数学的快速发展,及交叉学科的涌现,给传统中药的发展带来契机。本文尝试结合现代统计学和数学模型,电化学、胶体化学,材料科学及现代色谱检测的相关知识和原理,针对金银花研究中前期的实验设计优化部分精度不高,中期的实际生产工艺部分不够完善,后期的产品质量控制部分不能在线联用的三个问题,对三者进行探讨,主要内容包括:①利用星点设计-效应面优化法对超声提取绿原酸的实验参数进行优化,使用origin和design-expert软件处理实验相关数据,建立以溶剂(乙醇)浓度X1,超声反应时间X2、和料液倍量比X3为自变量,以提取出的绿原酸质量Y为函数的多元二项式方程:Y=1772.86-29.18X1-1.60X2-56.80X3+0.45X1X3+0.05X2X3+0.17X12+4.80E-0.03X22+3.58X32r=0.9644,根据此方程,结合效应面优化处理,得到理论的最优结果,并对其进行实验验证,预测值与实际值偏差为3.6%,证明CCD-RSD设计优化法应用于金银花中绿原酸的超声提取实验中,预测准确,实现了工艺的优化。②结合电化学、胶体化学的基本理论,分析绿原酸的化学性质及其纯化系统微观环境,对金银花提取绿原酸的传统工艺“水提醇沉”法进行查诊,对提取阶段和纯化阶段提出改进,小试实验和放大实验的研究结果表明,在提取阶段,新工艺使绿原酸的提取率比空白对照组提高了31.94%,放大试验的绿原酸提取率比空白对照组提高了72.87%;在纯化阶段,新工艺中绿原酸的损失率为8.66%,对比醇沉工艺降低了20%以上。因此,提出新的工艺“碱提絮凝”法,即在提取阶段,利用NaHCO3缓冲溶液,把传统工艺的中性纯化水优化为pH值为8.5左右的弱碱水;在纯化阶段,把水提液用食用安全的酸性物质(乙酸)调节成偏酸性(pH5.6),浓缩至料液倍量比为3%后,加入壳聚糖,使其在溶液中的质量分数为0.3%,20r/min低速搅拌3h。③建立金银花中黄酮类物质,芦丁、金丝桃苷和槲皮素的HF-LPME-UHPLC-MS检测方法。以HF-LPME作为前处理技术,工艺为:选用Accurel Q3/2聚丙烯中空纤维作为微萃取支架;用乙酸乙酯作为有机萃取剂;选择pH3.0的KH2PO4作为给出相,pH8.5的NaHCO3溶液作为接收相;磁流体粉末0.25g,搅拌速度为1000r/min,萃取时间为50min。以UHPCL-MS为检测手段:色谱条件:色谱柱为WatersAcquityTM公司BEHC18(50mm×2.1mm,1.7μm),流动相为甲醇(A)和0.1%甲酸溶液(B),流速为0.2mL/min;梯度洗脱,柱温30℃。质谱条件:电离源为电喷雾电离(ESI),检测方式为全扫描模式,采用正离子检测;维持碰撞池压力为334帕,毛细管电压为3千伏,锥孔电压30伏。结果表明:芦丁、金丝桃苷和槲皮素的线性范围分别为0.0227~1.195,0.0141~1.32,0.00832~1.649μg/mL,平均回收率为别为95.34%,95.17%,99.83%,富集倍数分别为38、42、83,检测限分别为0.0290.0170.006μg/L。得出:以HF-LPME作为液质联用的前处理技术,准确灵敏,提高了检测限和富集倍数,为检测金银花中的黄酮物质提供了可靠的方法。
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