白藜芦醇对TPC-1细胞生物学行为的影响

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目的:观察白藜芦醇(Resveratrol,Res)对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞生物学行为的影响,并探讨其可能的机制。方法:取生长状态良好的对数期人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞,CCK-8法检测不同浓度Res在不同时间段对TPC-1细胞增殖的影响,筛选药物作用的浓度和时间;根据筛选的药物浓度,Transwell检测Res作用后TPC-1细胞迁移的变化,流式细胞技术(Flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡和周期,qRT-PCR检测细胞中Bax/Bcl-2 mRNA表达比值、Caspase 3及Bcl-xl mRNA的表达量,Western blot(WB)检测上述细胞中凋亡蛋白Caspase3和抗凋亡蛋白Bcl-xl的表达;根据上述实验筛选药物干预的适宜浓度及时间,观察Res及PI3K抑制剂LY294002对TPC-1细胞的影响,实验分为6组:0、75、100μmol/L Res及20μmol/L LY294002、20μmol/L LY294002+75μmol/L Res、20μmol/L LY294002+100μmol/L Res,qRT-PCR检测Bax/Bcl-2 mRNA表达比值、Caspase 3及Bcl-xl mRNA的表达量,Western blot(WB)检测Akt、pAkt、Caspase3、Bcl-xl的表达。结果:1.与对照组相比,25、50μmol/L Res在72h对TPC-1细胞的增殖有一定的促进作用(P<0.05),75-200μmol/L Res对TPC-1细胞增殖抑制作用随作用时间延长逐渐增加(P<0.05);2.与对照相比较,75μmol/L组、100μmol/L组分别在24、48和72h显著地抑制TPC-1细胞的迁移,且各浓度及各时间段两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05);3.75和100μmol/L的Res均能使TPC-1细胞停滞在G0/G1期,且随着时间延长阻滞在G0/G1期的TPC-1细胞的百分比也在增加;4.随Res对TPC-1细胞作用浓度的增加及时间的延长,其凋亡率逐渐增加,且各浓度(0、75和100μmol/L)及各时间段(24、48、72h)比较差异均有统计学意义(P<0.05);5.与对照组相比,各时间段75、100μmol/L组Bax/Bcl-2 mRNA比值均升高(P<0.05),48h及72h时100μmol/L组Bax/Bcl-2比值较75μmol/L组升高,差异有统计学意义(P<0.05);对75μmol/L组,随着时间的延长,比值逐渐降低,各组之间差异均有统计学意义(P<0.05),在100μmol/L组,48h及72h时Bax/Bcl-2比值较24h均降低,差异有统计学意义(P<0.05);6.与对照组相比,各时间段75、100μmol/L组Caspase3 mRNA表达量均升高,Bcl-xl mRNA表达量均降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且各时间段和各浓度Caspase3 mRNA表达量差异均有统计学意义(P<0.05);但对于Bcl-xl mRNA,在100μmol/L组,其表达量逐渐降低,各时间段差异有统计学意义(P<0.05),在75μmol/L组,48h及72h时Bcl-xl mRNA表达量较24h降低(P<0.05);7.在Res处理的24h,与对照组相比,75μmol/L的Res组TPC-1细胞Caspase3的蛋白表达量略微增加,100μmol/L的Res组明显增加;Bcl-xl的蛋白表达量在75μmol/L和100μmol/L Res处理24h后明显减少。在Res处理的48和72h,75μmol/L和100μmol/L Res组TPC-1细胞Caspase3的蛋白表达量逐渐增加,Bcl-xl的蛋白条表达量逐渐减少;8.Res作用TPC-1细胞48h,观察到1-6组(0、75、100μmol/L Res及20μmol/L LY294002、20μmol/LLY294002+75μmol/L Res、20μmol/LLY294002+100μmol/LRes)Caspase3 mRNA表达量逐渐升高,Bcl-xl mRNA表达量逐渐降低,Bax/Bcl-2比值逐渐增加,差异均有统计学意义(P<0.05);9.与对照组相比,各组TPC-1细胞p-Akt、Bcl-xl蛋白表达量减少,Caspase3的蛋白表达量增加;加用LY294002干预处理后比Res组表达量显示更有差异性。结论:1.白藜芦醇在体外于75、100μmol/L浓度可抑制TPC-1细胞的增殖和迁移,并诱导其凋亡;2.白藜芦醇可能部分通过抑制PI3K/Akt信号通路,激活Caspase3基因和蛋白的表达,抑制Bcl-xL基因和蛋白的表达,从而诱导TPC-1细胞凋亡。
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