论文部分内容阅读
牙髓、根尖周病是口腔临床常见病和多发病。微生物感染，物理、化学刺激及机体免疫反应等都是牙髓、根尖周疾病的发病原因，其中又以定植于感染根管内的细菌微生物为主。大量临床研究和动物实验表明，病变的牙髓及根尖周组织中都可以分离培养出细菌。引起牙髓、根尖周疾病的微生物有：产黑色素菌群、梭杆菌、放线菌、螺旋体、粪肠球菌等等。迄今为止，根管治疗术（root canal therapy，简称RCT）是临床上治疗牙髓、根尖周病最常用、也是最有效的方法；它通过机械清创和化学消毒的方法预备根管，将存在于牙髓腔内已发生不可复性损害的牙髓组织和作为牙髓根尖周病的病源刺激物全部清除，经过对根管的清理、成形，必要的药物消毒，以及严密的根管充填，达到消除感染源，堵塞、封闭根管空腔，防止再感染的目的。但是临床上不乏有根管治疗失败的存在。目前普遍认为根管治疗术失败的主要原因是根充后根管、根尖残留微生物的存在。粪肠球菌就是根管治疗失败病例最常检出的的微生物。粪肠球菌（Enterococcus faecalis，E.faecalis，E.f）属于链球菌科、肠球菌属，为人类上呼吸道、口腔及肠道系统的常驻菌，病变的牙髓及根尖周组织中也可以分离培养出E.faecalis，在根管治疗失败的根管中的检出率高于初次感染根管中的检出率。E.faecalis抵御外界不利因素能力强，通常可单一或者作为多种细菌混合感染的主要致病菌造成根管感染。它不但能粘附在根管壁上形成生物膜，而且可以侵入到牙本质小管中并能在很艰苦的条件下生存繁殖。细菌生物膜是包被于细胞外基质中，粘附于非生物或生物体表面的微生物集落。生物膜为细菌提供一个安全稳定的生存生长环境，有助于细菌抵抗外界的不利因素，并增强细菌毒性。目前的根管治疗术很难将其完全清除。根管冲洗是根管治疗过程中清除根管内微生物感染的重要步骤。然而，迄今为止临床常用的根管冲洗剂不是临床效果不好，就是对组织有毒副作用。因此，寻找一种安全有效地杀灭根管内的E.faecalis生物膜的根管冲洗剂，对提高根管治疗术的成功率有重要的意义。电解质水是近年来应用于临床的新型根管冲洗剂，通过电解质水生成仪电解0.1%的氯化钠产生，包括强酸性电解质水（strong acid electrolyzed water， SAEW）和碱性电解质水（alkaline electrolyzed water， AEW）。SAEW最早是在日本被用于环境食品农业等的消毒，并于1996年用于根管消毒。SAEW不仅具有杀菌作用快、抗菌谱广、对组织无毒、无刺激等特点，而且使用后会还原成水，具有环保的优点。AEW有很强的清洁和去污能力，它可以安全有效地溶解坏死组织，还有去除根管玷污层的能力，以及环保的优点。本研究的目的就是通过不同的实验观察电解质水对E.faecalis生物膜的作用。实验主要分为以下三个部分：一、电解质水对E.faecalis生物膜作用的扫描电子显微镜观察在无菌玻片上形成E.faecalis生物膜（24h），分别用SAEW和AEW处理1min、5min及10min；5.25%NaOCl和生理盐水分别作为阳性对照和阴性对照。处理后的样本固定（2.5%戊二醛，4℃，隔夜）、脱水（50%、70%、80%、90%的乙腈各20min，100%两次各20min）、干燥、喷金后用SEM观察。结果显示，除生理盐水组以外，其他各组E.faecalis的形态变化都随处理时间地延长而越来越明显。提示电解质水对E.faecalis生物膜有有效地杀菌作用。二、电解质水对离体牛牙根管中E.faecalis生物膜的作用研究本实验在实验一的基础上，进一步观察电解质水对模仿临床根管情况的离体牛牙根管中E.faecalis生物膜的杀菌作用。截取4mm中段牛牙根，消毒后接种E.faecalis，培养28d后E.faecalis牛牙感染模型建立成功。然后分别用SAEW和AEW处理1min、5min及10min，5.25%NaOCl和生理盐水分别作为阳性对照和阴性对照。各组处理后磨切根管内侧牙本质，收集牙本质碎屑，提取细菌基因组DNA做实时荧光定量PCR进行绝对定量。结果表明，SAEW和AEW的杀菌效果都随处理时间地延长而增强。同时，SAEW有与5.25%NaOCl基本一致的杀菌效果，AEW有一定的杀菌效果，但是比SAEW和5.25%NaOCl的杀菌作用弱。进一步确定了电解质水对E.faecalis生物膜的杀菌作用，同时说明了SAEW可能可以作为根管冲洗剂用于根管治疗术。三、电解质水对BioFlux系统中E.faecalis生物膜的作用研究在可以提供恒定剪切力的BioFlux系统中形成E.faecalis生物膜，然后分别用SAEW和AEW处理1min、5min及10min；5.25%NaOCl和生理盐水分别作为阳性对照和阴性对照。各组处理后用LIVE/DEAD荧光染色剂染色。然后用激光共聚焦显微镜观察。所得图像中绿色代表活菌，红色代表死菌。用NIH图像分析软件ImageJ计算红绿荧光的比例，得出各种冲洗剂处理后的相对活菌比例。结果与实验一和实验二的结果一致。并用在玻片上形成的E.faecalis生物膜进行LIVE/DEAD染色及活菌计数与BioFlux系统中的结果进行比较，发现结果都与前面实验的结果一致。进一步说明了SAEW有可能作为相对比较理想的根管冲洗剂应用于临床。