【摘 要】
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产酶溶杆菌OH11菌株对许多植物病原菌的生长有着抑制作用。该菌产生的热稳定抗真菌因子(Heat-Stable Antifungal Facter,HSAF)次生代谢产物,能够抑制植物病原真菌及卵菌生长。
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产酶溶杆菌OH11菌株对许多植物病原菌的生长有着抑制作用。该菌产生的热稳定抗真菌因子(Heat-Stable Antifungal Facter,HSAF)次生代谢产物,能够抑制植物病原真菌及卵菌生长。由于HSAF合成基因簇较大,难以通过现有的大肠杆菌或其他表达系统实现其异源表达;HSAF的化学结构较为复杂,无法进行人工合成。因此,研究产酶溶杆菌OH11的HSAF生物合成调控机制,对调控机制中的关键因子进行改良,是现阶段有效提升HSAF产量、实现产业化的一个关键环节。本研究通过改良OH11中的自溶基因,延缓其自溶时间,增加其发酵时间,达到提高OH11的次生代谢产物HSAF产量的目的。前期发现在发酵过程中,产酶溶杆菌OH11菌液在营养缺陷型培养基(10%TSB)中OD600达到2.0后逐渐下降,而在营养丰富培养基(100%TSB)中OD600则可以达到3.0-3.5。针对这种现象,本研究对OH11在不同营养条件下进行培养,通过转录组测序的方式,挑选基因表达具有显著性差异的基因;同时通过生物信息学手段,利用同源比对,发现产酶溶杆菌OH11基因组中存在细胞壁溶解酶同源性较高的蛋白。通过对这九个基因进行敲除试验,确定该基因的生物学功能,分析基因与OH11自溶度的关系。结果显示,突变菌Δ0714、Δ1014、Δ2162、Δ2703、Δ2875、Δ3671、Δ4232和Δ4751在自溶表型检测中与野生型菌株相比没有差异,但这些基因的缺失却降低了HSAF的产量,调节机制尚不清楚;Δ0714、Δ1014、Δ2162、Δ2703、Δ2875、Δ3671、Δ4232、Δ4745和Δ4751在检测四种胞外酶和Twitching motility时,与野生型菌株相比并没有差异;基因2703、3671、4232、4745和4751参与调节产酶溶杆菌OH11的菌落形态,如何调节尚不清楚。
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