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研究目的及背景：组织蛋白酶S (CTSS)已经被报道可以增加众多恶性肿瘤的表达及肿瘤活性。然而沉默CTSS诱导肝癌细胞MHCC97H凋亡的作用机制目前尚不清楚。方法：采用已获得的肝癌细胞系作为基础的研究实验系统来评价CTSS在人肝癌细胞中的作用和相关机制,利用荧光定量PCR和Western blot筛选高表达CTSS的肝癌细胞系；利用慢病毒干扰CTSS及其受体蛋白酶激活受体-2(PAR2)的表达,并通过流式细胞仪检测其凋亡,利用Western blot检测其NF-κB通路的变化；利用蜂毒素和多柔比星药物干预进行对比研究观察,利用流式细胞仪及Western blot分别评价沉默CTSS后对药物敏感性变化的情况,并检测Caspase3蛋白的激活情况；最后利用裸鼠皮下移植瘤模型评估沉默CTSS后,肝癌细胞在体内的生长及对蜂毒素敏感性的分析,利用ELISA法检测Caspase 3活性。结果：在13株肝癌细胞系中,CTSS在MHCC97-H中表达最高。利用慢病毒介导的小分子干扰技术转染沉默CTSS基因表达的PLVT1150中,CTSS基因及PAR2的mRNA和蛋白质含量相应地显著性减少；相反,过表达CTSS基因的PSB880中,CTSS基因及PAR2的mRNA和蛋白质含量相应地显著性增加。从而可以推测PAR2及CTSS基因之间存在正相关的关系。沉默CTSS基因的MHCC97-H细胞中,NF-κB信号通路的活性被抑制,可以观察到更多的MHCC97-H细胞的凋亡(30.07%±1.8 vs.18.58%±1.6)；但沉默CTSS过表达PAR2可使其凋亡率下降(30.07%±1.8 vs.19.72%±1.5)。在MHCC97-H细胞中分别使用两种可引起细胞凋亡药物,蜂毒素(0,4和8μg/mL)处理30min,多柔比星(0和5μg/mL)处理24h,观察两种药物对shCTSS和对照组细胞凋亡率。与对照组相比,PLVT1150细胞对蜂毒素(18.87%±2.1 vs.4.27%±.9, 36.72%±2.2 vs.15.32%±1.7,52.98%±1.5 vs.28.86%±2.2)和多柔比星(19.13%±2.0 vs.3.84%±1.4,71.83%±2.5 vs.32.66%±1.2)更敏感。沉默CTSS后,活化的Caspase-3显著增加,表明CTSS与MHCC97-H细胞凋亡相关联。在裸鼠体内研究中,蜂毒素协同CTSS沉默可以显著抑制肝癌的生长,并对蜂毒素引起的凋亡更加敏感。结论：慢病毒介导的沉默CTSS可以显著诱导MHCC97-H细胞的凋亡和增加化学药物敏感性。这使得CTSS成为肝癌治疗的潜在分子靶点,并为肝细胞癌的治疗提供了一个有吸引力的抗癌策略。