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缢蛏（Sinonovacula constricta）是我国重要的经济贝类，具有良好的发展前景。缢蛏的养殖先在南方兴起，而后由南到北发展，因其肉质鲜美，成为我国重要的经济贝类。多巴胺受体作为神经系统中重要的神经递质受体，为国内外学者所关注。多巴胺受体在感觉、运动、免疫、摄食、生长发育等生物学过程中都是重要的调节者和参与者。本研究通过 RACE 技术克隆得到缢蛏两个多巴胺受体基因，分析了基因的序列特征和时空表达特征；通过抑制剂筛选实验，基于多巴胺受体的药理学特征鉴定出多巴胺受体类型，并筛选出适合缢蛏D2类多巴胺受体的抑制剂和作用浓度。探究了多巴胺受体在损伤修复中的作用，基于筛选出的抑制剂探究鳗弧菌感染之后的免疫应答反应，并检测超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)和过氧化氢酶（Catalase，CAT）的含量变化，初步探究了D2类受体在缢蛏幼虫发育阶段中的作用。具体的研究成果如下： 1缢蛏多巴胺受体的克隆及其选择性多聚腺苷酸化（alternative polyadenylation， APA）变异体 从缢蛏转录组中得到两个多巴胺受体的基因片段ScDopR1和ScDopR2，经过RACE克隆获得两个基因的cDNA全长，ScDopR2-1基因全长2216bp，包含5’UTR区171bp，ORF区1814bp， 3’UTR区231bp，共编码597个氨基酸残基；ScDopR2-2基因发现两个可变多聚腺苷酸化变异体，包含相同的 ORF 区和 5’UTR 区，ORF区长1440bp，编码479个氨基酸残基，5’UTR区长34bp，两个变异体的区别在于3’UTR 区域的长短，ScDopR2-2b 基因在 polyA 尾前比 ScDopR2-2a 基因多出了960bp，ScDopR2-2a变异体cDNA全长1824bp，ScDopR2-2b变异体cDNA全长2758bp。基因序列特征的分析和功能域的预测结果显示，两个受体均具备 G 蛋白偶联受体的典型结构域，以及具有较长的第三胞内环以及较短的C-末端，基于D2类受体的结构特征，初步推测两个多巴胺受体均为D2类多巴胺受体。 2缢蛏多巴胺受体的时空表达特征分析 利用荧光定量PCR检测了多巴胺受体在缢蛏成体组织的表达情况，结果表明，两个基因在斧足、肝、鳃、水管、唇瓣、外套膜、性腺中均有表达， ScDopR2-1在水管和唇瓣中的表达量最高，在斧足、鳃和外套膜中的表达量次之，在肝和性腺中的表达量最低。ScDopR2-2基因同源区段和ScDopR2-2b基因的表达模式基本相同，表达量最高的组织均为水管，在水管、鳃、斧足中的表达量显著高于其他组织。ScDopR2-2基因同源区段与ScDopR2-2b相比，组织的表达量也存在差异性， ScDopR2-2基因同源区段的表达量在鳃中高于斧足，而ScDopR2-2b基因在鳃中的表达与斧足的大致相同。多巴胺受体在缢蛏早期发育阶段的检测结果表明， ScDopR2-1基因在匍匐期表达量最高，在D型期表达量次之，在这两个时期出现两个表达量峰值，呈现出先增加再减少再增加再减少的表达模式。而 ScDopR2-2基因在壳顶期的表达量最高，从卵裂期、担轮期、D 型期表达量逐渐升高，到壳顶期表达量出现峰值，匍匐期又开始下降，匍匐期与稚贝期的表达量大致相同。 3多巴胺受体抑制剂的筛选和多巴胺受体类型的验证 在抑制剂筛选实验中，选取三种抑制剂多潘立酮（Domperidone， Domp）、舒必利（Sulpiride，Sulp）、盐酸氯丙臻(Chlorprothixene hydrochloride,Chlo)作为受试物，以各自溶剂为对照组，选取 2 小时和 6 小时两个时间点，通过检测不同抑制剂作用浓度（10-2M、10-3M、10-5M）下缢蛏血清中的cAMP含量，以及采用荧光定量检测多巴胺受体基因的表达含量变化，对缢蛏多巴胺受体进行抑制剂种类和作用浓度的筛选。实验结果表明，注射2小时和6小时两个时间点，Chlo组的10-2M的浓度下两个时间点基因表达量与对照组相比均显著下降，而cAMP也符合相比对照组上升的预期实验效果。从而筛选得到多巴胺受体的合适抑制剂为Chlo，筛选出适合的作用浓度为10-2M。根据已知的药理学特征，抑制性配体刺激D2类受体的cAMP水平上升，进一步将多巴胺受体类型验证为D2类多巴胺受体。 4缢蛏水管损伤实验和鳗弧菌感染实验 缢蛏水管损伤实验，进水管损伤处理，不同时间点检测多巴胺受体的表达量，结果表明在进水管损伤后，表达量在12h、48h时呈显著上调，而在8h、24h、72h呈现显著下调，暗示缢蛏多巴胺受体基因参与水管损伤后的反应过程，其结果上升-下调-上升的表达模式，推测与多巴胺的补偿作用有关。鳗弧菌侵染实验中，设置三个实验组别：注射海水100ul(H组)、注射海水50ul+菌50ul(HJ组)、注射抑制剂50ul+菌50ul(CJ组)，其中以H组为对照组。结果表明，ScDopR2-1基因在2h和4h的表达量上升，8h、12h、24h下降；三个实验组别中，CJ组比HJ组和H组的表达量低，CJ组在4h、8h、12h表达量比H组显著下降，而HJ组4h、8h比H组的表达量显著下降。ScDopR2-2 基因的表达量也在注射的 2h、4h 表达量升高，在8h、12h、24h表达量下降，三个实验组别中，HJ组在2h和4h比H组显著下降，CJ组比H组在8h显著下降，CAT检测结果表明，免疫反应启动，抑制剂对免疫过程产生影响，多巴胺D2类受体参与调节免疫反应。 5缢蛏多巴胺受体在早期发育中的作用 利用受体抑制剂探究多巴胺受体在缢蛏早期发育中的作用，设置 4 种抑制剂作用浓度（10-2M、10-3M、、10-4M 、10-5M），抑制剂处理缢蛏壳顶期幼虫，24h后，计算幼虫的长足率，结果表明，4种浓度抑制剂处理的幼虫长足率分别为20%， 35%，40%和40%，而空白组为60%，D2类多巴胺受体抑制剂起到了一定的抑制效果，推断出多巴胺受体在缢蛏壳顶期幼虫的发育中起到作用。