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番茄(Solanum lycopersicum)是重要的园艺作物,具有较高的营养价值,栽培广泛;且番茄基因组小,基因转化较易进行,因此,番茄作为科学研究的重要模式作物,在科学研究中的作用日益突出。CRISPR/Cas基因编辑技术近些年来快速发展,CRISPR/Cas9突变体库已经开发用于在培养的真核细胞、水稻中全基因组突变筛选、番茄免疫相关基因筛选等。本研究利用CRISPR/Cas9技术构建番茄转录因子突变体库,为进一步研究相关转录因子功能奠定基础。论文主要研究结果如下:应用生物信息学技术,从NCBI番茄基因组数据中确定了 1845个转录因子基因座,转录因子1476个,去除冗余后转录因子990个,转录相关蛋白1476个。以此构建番茄转录因子CRISPR/Cas9质粒文库。从潮霉素浓度、侵染菌液浓度及侵染时间、AS浓度四个方面优化M82与AC两个品种的转基因转化体系。潮霉素对M82的致死浓度为3mg/L,最宜侵染组合OD600=0.8+4min,最宜AS浓度为100 μ mol/L;而潮霉素对AC致死浓度为2mg/L,最宜侵染组合为OD600=0.6+6min,最宜AS浓度为50或100 μ mol/L。初步构建了番茄转录因子突变体库。使用番茄转录因子CRISPR/Cas9质粒文库,农杆菌介导的叶盘法转化得到组培苗926株,阳性植株452株,使用CTAB提取T0代DNA,PCR扩增,测序鉴定含单个sgRNA 159株,涉及的转录因子有65个,根据转录因子全长设计引物,检测到有效有突变类型20种,涉及的转录因子16种。初步明确了NF-Y gamma like基因功能。nf-y gamma like突变体种子萌发加快、植株矮化,幼苗生长加快,初生根伸长加快,及对侧根的生长也有一定的影响。在150mMNaCl盐胁迫下,观测nf-ygamma like T0与WT表型差异,与WT相比,突变体的耐盐性减弱;使用RT-PCR分析低盐胁迫下番茄NF-Y gamma like基因表达量变化,在胁迫的初期阶段,表达量快速上升,随后下降,在恢复处理后,表达量随之上升。