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目的:探讨Micro RNA-146b-5p(mi R-146b-5p)的生物学性能,检测其对小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)成熟的影响,以及对小鼠骨片来源间充质干细胞(MSC)成脂分化能力的影响。方法:(1)从C57BL/6小鼠骨髓中分离CD11b+单核细胞,并对其进行5-7天的诱导分化,使其成为未成熟DC(i DC)和成熟DC(m DC),采用流式细胞术分别检测其细胞表型。对单核细胞及不同时期的DC进行Micro RNA芯片分析,依据芯片结果选择在DC成熟过程中高表达的mi RNAs,并通过荧光定量PCR(q-PCR)进一步验证,发现mi R-146b-5p在分化过程中高表达且变化显著。进一步,将mi R-146b-5p mimics或inhibitors转染小鼠骨髓CD11b+单核细胞,吞噬实验和混合淋巴细胞反应(MLR)检测mi R-146b-5p对DC成熟的影响。(2)从C57BL/6小鼠骨实质中分离培养MSC,并经流式细胞术检测鉴定其表型。q-PCR检测骨实质来源的MSC在诱导成脂过程中,细胞内mi R-146b-5p表达水平的改变。将mi R-146b-5p mimics或inhibitors转染MSC并检测其成脂分化能力的改变。培养14d后,油红O染色鉴定其成脂分化能力,并通过q-PCR检测成脂分化因子C/EBPα和PPARγ的表达,Western Blot检测PPARγ蛋白的表达,以阐述mi R-146b-5p对小鼠骨实质来源的MSC成脂分化能力的影响。结果:(1)我们采用免疫磁珠法成功分离出小鼠骨髓来源的CD11b+单核细胞,并诱导成i DC和m DC。流式细胞术检测结果表明,小鼠骨髓来源的i DC低表达CD80、CD86、CD11c、MHCⅡ,高表达CD11b;小鼠骨髓来源的m DC高表达CD80、CD86、CD11c、MHCⅡ,低表达CD11b,符合i DC和m DC的表型特征。对芯片结果进行比较筛查,发现mi R-146b-5p、mi R-21a-5p、mi R-690、mi R-223-3p、mi R-155-5p、mi R-107-3p、mi R-1224-5p和mi R-5112等在单核细胞向DC发育成熟过程中表达量较高且差异显著,经由q PCR检测发现mi R-146b-5p具有显著改变。进一步研究发现,小鼠骨髓来源的CD11b+单核细胞在诱导DC成熟的过程中,mi R-146b-5p的表达量随着诱导天数的增加而降低(p<0.01)。将mi R-146b-5p mimics或inhibitors转染小鼠骨髓CD11b+单核细胞,吞噬实验和混合淋巴细胞反应检测mi R-146b-5p对DC成熟的调控作用,结果表明,mi R-146b-5p缺失可导致单核细胞的吞噬能力显著降低,表现为成熟DC表型。MLR检测结果显示,转染mimics会降低DC对T细胞的刺激能力。(2)成功分离出小鼠骨实质来源的MSC,并符合MSC的典型特征,即细胞形态呈长梭形,高表达间质细胞表面标志物CD29和CD105,高表达干性表面标志物Sca-1,不表达内皮表面标志物CD31、不表达造血细胞表面标志物CD34、CD11b、CD45和主要组织相容性复合体MHCⅡ以及CD140a。通过q-PCR检测骨实质来源的MSC在诱导成脂过程中mi R-146b-5p的表达,结果显示,随着诱导时间的增加,mi R-146b-5p的表达亦显著增加,7d后趋于平稳(p<0.01)。将mi R-146b-5p mimics或inhibitors转染MSC,可有效改变细胞内mi R-146b-5p的表达。与对照组相比,转染mi R-146b-5p mimics后细胞表达mi R-146b-5p显著上调(p<0.001),转染mi R-146b-5p inhibitors后细胞表达mi R-146b-5p显著下调(p<0.01)。油红O染色结果表明,诱导14d后,过表达mi R-146b-5p可显著提高分化细胞内脂滴数目和成脂比例;而抑制mi R-146b-5p后可有效阻断诱导成脂过程,脂滴减少,脂肪细胞明显减少。q-PCR检测结果表明,与自分化组相比,转染mi R-146b-5p mimics后细胞表达C/EBPα和PPARγ显著上调(p<0.01),转染mi R-146b-5p inhibitors后细胞表达C/EBPα和PPARγ显著下调(p<0.05)。Western Blot检测结果显示,转染mi R-146b-5p mimics后细胞表达PPARγ显著上调,转染mi R-146b-5p inhibitors后细胞表达PPARγ显著下调。结论:mi R-146b-5p inhibitors可促进小鼠骨髓CD11b+单核细胞来源的DC成熟,而mi R-146b-5p mimics可有效促进小鼠骨实质来源的MSC向脂肪细胞分化。上述结果提示,mi R-146b-5p具有调控DC发育成熟和MSC成脂分化的作用,其调控机制有待深入探讨。