论文部分内容阅读
目的:建立大鼠坐骨神经损伤神经再生室模型,观察骨髓间充质干细胞(Bone marrowmesenchymal stem cells,BMSCs)植入神经再生室后对神经功能恢复的影响,并初步探讨其作用机理。方法:采用全骨髓法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,待原代培养的细胞达70%以上汇合时,用含胰酶和EDTA的消化液消化细胞,进行传代培养。传至第3代的骨髓间充质干细胞采用流式细胞术检测表面抗CD44、CD45、CD71的表达,从而对传代培养的骨髓间充质干细胞进行鉴定。将32只Wistar大鼠随机分成两组,即实验组和对照组,每组16只。两组大鼠均行左侧的坐骨神经锐性切断,推剥神经外膜,使远近端的神经束露出2mm左右,用刀再切除神经纤维2mm,使神经束缩回外膜内,随即予以显微缝合,形成神经再生室。实验组的神经断端植入传3代并且用BrdU标记的骨髓间充质干细胞,而对照组则植入纯的DMEM培养液。分别在术后第4周和第8周,通过一般状况观察、神经电生理、免疫组化等方面进行观察。结果:在光学显微镜下骨髓间充质干细胞呈纺锤形、成纤维细胞样生长,漩涡状分布。传至第3代的细胞形态趋于一致,经免疫荧光染色P3的骨髓间充质干细胞表达特异性标志物:CD45(-),CD44(+),CD71(+)。大体观察,两组大鼠足底均有溃疡形成,实验组溃疡愈合较对照组早。术后第3周,两组大鼠跛行改善,步态较稳。肉眼观察发现,神经切断处周围有肌肉组织粘连,清除粘连组织后,可以观察到神经切断处愈合良好。术后第4周和第8周实验组大鼠的坐骨神经功能指数(Sciatic functional index,SFI)、神经传导速度、腓肠肌湿重和肌纤维横截面积均高于同时期的对照组(P＜0.05)。术后第8周免疫组化检查发现骨髓间充质干细胞转化成雪旺氏细胞及实验组雪旺氏细胞较对照组明显增多。结论:体外培养的BMSCs进行体内移植后,能在局部损伤微环境中通过向雪旺氏细胞的转化和促进雪旺氏细胞的增殖和分化,从而对损伤神经起到修复和再生作用。