重组载脂蛋白B100对奶牛脂肪代谢的调控作用

来源 :吉林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:litao2006
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本研究利用现代临床检验技术及分子生物学实验技术,对围产期高产和低产奶牛的部分血液生化指标进行了比较分析,初步探讨了高产健康奶牛与酮病及亚临床酮病对奶牛产量的影响,研究了在不同情况下与围产期酮病、脂肪肝发生密切相关的载脂蛋白B100在血液中的含量。克隆了牛载脂蛋白B100基因,构建了载脂蛋白B100表达载体,进行了大肠杆菌的原核表达;并且证明了表达的重组载脂蛋白B100具有较好的生物学活性。应用荧光定量RT-PCR方法,应用所表达的重组载脂蛋白B100,进行了动物实验,研究了载脂蛋白B100对脂肪代谢关键受体VLDLR和LDLR mRNA表达水平调控作用,为从细胞因子水平寻找围产期奶牛能量代谢负平衡的发生机制,以及应用现代生物学手段防治该类疾病的新方法进行了实验探索。载脂蛋白B100基因的克隆与序列分析表明,我们获得的747bp目的基因与GenBank中牛载脂蛋白B100基因的编码序列相比较,同源性为100%,证明所克隆的基因序列是完全正确的。大肠杆菌原核表达实验表明,载脂蛋白B100基因被正确整合到了受体菌GS115的基因组上,牛重组载脂蛋白B100成功实现分泌表达。建立了VLDLR和LDLR mRNA荧光定量RT-PCR方法,荧光定量RT-PCR方法灵敏度高、准确性好、稳定性强,初步应用于VLDLR和LDLR mRNA表达水平的定量分析。动物实验表明载脂蛋白B100对脂肪细胞和肝细胞VLDLR和LDLR mRNA的表达具有显著的上调作用。ApoB100通过对VLDLR和LDL RmRNA表达的上调来促进肝脏脂肪代谢产物VLDL和LDL从肝脏向外周组织转运,从而降低肝脏脂肪沉积。
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