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Ⅴ型磷酸二酯酶（PDE5）能特异性水解cGMP,使其浓度降低,男性勃起功能障碍（ED）与cGMP的水平下降有着密切关系,因此,可以通过抑制PDE5酶活性使cGMP水平升高,从而达到治疗ED的目的。ED严重影响男性的身心健康。所以,研究和开发特异性的PDE5抑制剂尤为重要。本项目对PDE5及其新合成的化合物CYⅠ、CYII、CYIII、CYIV、CYⅤ和CYⅥ进行了如下研究:1.人血小板分离及其PDE5的提取、纯化新鲜的机采血小板（来自健康捐献者）加入冰冷Hepes缓冲液悬浮,利用超声波粉碎机破碎血小板,离心,上清液采用Pharmacia FPLC系统Acta Primer以及Pharmacia Mono Q阴离子交换柱HR 5/5分离纯化PDEs,得到分步收集液。2. PDE活性测定分析PDE的活性时,分步收集液（2～5 uL）, 3H-cGMP（2 mCi/mL）, MgCl2 （5 mmol/L）溶于Tris-HCl缓冲液中。加入3H-cGMP启动PDE5水解反应,水浴箱中孵化,沸水浴终止反应。然后每管加入蛇毒（1mg/ml）,30℃保温,再加入Bio-Rad AG1-X2阴离子交换树脂,间断混匀,放置30min后瞬时离心取0.5ml,加入5ml闪烁液,用sigma LS1801液闪仪测定各管终产物的cpm值。通过比较分步收集液水解3H-cGMP活性,表明PDE5集中在第5管和第6管。进一步确定其最适反应条件为:最适反应时间为15min,最适酶量为2ul（PDE5原液）和最适底物浓度为0.2pmol/ul。PDE5酶的活性单位为8.89×10-5nkat。3.Ⅴ型磷酸二酯酶抑制剂的筛选以最佳反应条件用于分析CYⅠ、CYII、CYIII、CYIV、CYⅤ和CYⅥ对PDE5的抑制效应动力学,六种新合成的化合物的浓度均分别为10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L、10-10mol/L和10-11mol/L。用sigma LS1801液闪仪分别检测加入样品及未加样品时的cpm值,通过计算它们对PDE5的抑制率（以SDL为对照）,利用依格线性回归Ver2.5软件对PDE5抑制效应进行回归分析,求得CYⅠ、CYII、CYⅤ、CYⅥ和SDL的IC50值分别为0.0200mmol/L、0.0032 mmol/L、0.0027 mmol/L、0.0044 mmol/L和0.0031 mmol/L。CYIII和CYⅣ的浓度为10-6 mol/L时,对纯化得到的PDE5活性几乎无抑制作用。结果表明,CYⅤ对PDE5的抑制作用程度强于SDL的;而CYII和SDL对PDE5的相似;CYⅥ相比之下,则较弱;CYⅠ的作用最弱。由此初步断定,在这六种新合成的化合物中,CYⅤ对PDE5具有很好的抑制作用,为后续工作奠定基础。有望成为对ED治疗有效的药物。