背景与目的随着我国经济不断发展目前我国人口结构正逐渐步入老龄化社会,在生命科学领域针对衰老本质及如何抵御衰老的研究日益受到研究者的重视。由于卵巢的衰老可导致其内分泌功能衰退继而可引发严重的围绝经期症状和诸多年龄相关疾病。这些都严重影响女性健康及生活质量,给家庭社会带来严重经济负担。故研究卵巢衰老确切机制并研究出有效延缓卵巢衰老靶点成为当务之急。由于卵巢衰老调控机制复杂过程漫长涉及卵泡数量质量双重下降,因此我们联合连续排卵和臭氧吸入两种造模方法建立一种新的能够模拟生理性卵巢衰老的小鼠模型。利用年龄及生殖内分泌相关指标对造模效应进行评估。随后我们分别检测了缺氧诱导因子-1在卵泡不同发育阶段,小鼠不同周龄以及在造模不同处理组中表达。并分析缺氧诱导因子-1在卵泡发育,卵巢衰老过程中的作用。方法联合连续序贯腹腔注射孕马血清,人绒毛膜促性腺激素,前列腺素F2a产生连续超数排卵结合臭氧吸入构建生理性小鼠卵巢衰老模型；随后采用免疫组织化学方法、实时定量聚合酶链反应检测靶基因的表达定位及丰度。应用卵泡计数分析卵巢内各级卵泡比例。电镜下观察细胞整体大小,形态及细胞器超微结构变化。酶联免疫吸附测定实验检测激素表达水平改变。产仔试验检测造模方法对小鼠生育力影响。利用以上方法综合评价生理性小鼠卵巢衰老模型效果。随后采用免疫组织化学方法检测缺氧诱导因子-1在卵泡不同发育阶段,不同周龄窦状卵泡以及在造模不同处理组中窦状卵泡表达探讨缺氧诱导因子-1在卵泡发育和卵巢衰老过程中的作用。结果(1)10次连续超数排卵可以明显降低卵巢中AMH表达以及始基卵泡比例。超微结构显示颗粒细胞中脂滴明显减少,进而造成雌孕激素分泌下降,产仔总数下降,产仔间隔时间延长。(2)臭氧吸入可以明显升高卵巢内SOD2, CAT表达以及氧化产物含量。超微结构显示颗粒细胞中线粒体损伤形态改变。产仔总数下降,产仔间隔时间延长。(3)两者联合效应叠加。(4) HIF-1a在卵泡中卵母及颗粒细胞均有特异性表达,其表达水平随卵泡的发育而升高,窦状卵泡中表达水平最高。(5) HIF-la, VEGF在窦状卵泡中表达水平随小鼠增龄而升高。(6) HIF-la在生理性卵巢衰老模型各处理组窦状卵泡中均有明显升高。(7) Egr-1、Gadd45a蛋白在不同发育阶段卵泡的卵母细胞及颗粒细胞中均有表达,表达随卵泡发育而增强。结论(1)10次连续超数排卵可以明显降低卵巢中始基卵泡数量。(2)臭氧吸入可以明显升高卵巢内氧化应激压力。(3)联合连续排卵和臭氧吸入成功构建生理性小鼠卵巢衰老模型。(4) HIF-1a可能通过调节卵泡中血管发育参与卵泡发育过程。(5)增龄过程中卵巢中窦状卵泡缺氧程度增加。(6)连续超数排卵和氧化应激压力升高均会引起卵巢内HIF-la表达增高。(7)Egr-1、Gadd45a在卵泡的生长发育及闭锁过程中可能起重要调控作用。