论文部分内容阅读
部分miRNAs可以通过抑制癌基因的表达,发挥肿瘤抑制基因的作用,在肿瘤恶性进程中,常伴随这部分miRNAs基因沉默失活。HDAC作为辅阻遏物参与形成转录因子复合体,介导肿瘤抑制基因沉默失活导致肿瘤发生,用HDACi抑制HDAC活性,能重新激活沉默基因的表达。用HDACi TSA作用于乳腺癌SK-BR-3细胞后,检测到7个miRNAs表达升高,5个miRNAs表达降低;其中miR-146a,在TSA作用前处于沉默状态,检测不到其表达,在TSA作用后表达升高。通过在细胞中过表达miR-146a,验证了它可以靶向CXCR4 3`-UTR,通过抑制翻译来降低其表达,从而降低SDF-1趋化的肿瘤细胞侵袭,并抑制肿瘤细胞生长、增殖,确立了miR-146a作为肿瘤抑制基因的地位。为了研究miR-146a基因表达调控机制,用5`-RACE实验确定了miR-146a基因转录起始位点,用于分析其启动子区调节因子结合状态。通过染色质免疫共沉淀实验证实,组蛋白H3K56乙酰化和激活基因表达紧密相关,不加TSA刺激时,几乎检测不到miR-146a基因启动子区组蛋白H3K56乙酰化,伴随基因沉默;给予TSA刺激时,启动子区组蛋白H3K56乙酰化水平显著升高,伴随激活基因表达。进一步的实验证实,CBP和P300是组蛋白H3K56乙酰基转移酶,作为辅激动蛋白参与激活miR-146a基因表达;HDAC1是组蛋白H3K56去乙酰化酶,作为辅阻遏物导致miR-146a基因沉默。TSA作用于细胞,能抑制HDAC1活性,HDAC1作为辅阻遏物的作用被解除,miR-146a基因启动子区募集了更多的辅激动蛋白CBP和P300,后者介导了启动子区组蛋白H3K56乙酰化,伴随PolⅡ结合到启动子区,启动基因转录,从而揭示了表观遗传学因素参与调节miR-146a基因表达的机制。不同肿瘤细胞中,存在miR-146a基因表观遗传学调控多样性,在观察的乳腺癌,胃癌,肝癌,肺癌,卵巢癌和子宫内膜癌细胞中,单独使用TSA或者联合使用去甲基化药物5-Aza-CdR能上调miR-146a的表达,为恢复肿瘤抑制基因的功能提供了新策略,也为HDACi抗肿瘤效应提供了新证据。用Herceptin作用于SK-BR-3和SGC-7901细胞,能上调miR-146a的表达,并降低CXCR4表达水平,为Herceptin抗肿瘤效应提供了新证据,即可以通过上调miR-146a的表达来降低CXCR4的表达水平。