替尼泊苷为鬼臼脂毒类抗肿瘤药物,主要用于治疗胶质瘤,非小细胞肺癌等,由于其水溶性极差,其注射液中含有大量的增溶剂Cremophor EL,具有毒副作用,从而限制了其临床应用。本课题选用自微乳作为替尼泊苷静脉注射给药系统,以期能够增加替尼泊苷注射液在输注过程中的稳定性,避免增溶剂所带来的毒副作用,为替尼泊苷的临床应用奠定了基础。通过单因素试验,确定了包载替尼泊苷的自微乳处方,处方组成如下:替尼泊苷 50mg,DMA3000μL,MCT250mg,E-80 2,000mg,无水乙醇加至 10mL。TEN-SMEDDS用5 %葡萄糖注射液水化后能够快速形成均一的乳状液,粒径与Zeta 电位分别为为 292±21 nm (PDI 0.433±0.035)和-7.5±1.7 mV,通过 TEM 观察到所形成的乳液中乳滴为近圆形,大小均一,无粘连,且能稳定4h以上,该制剂稀释后的稳定性较VUMON显著提高,提高了替尼泊苷制剂在输注过程中的稳定性。体外释放研究表明,TEN-SMEDDS用5 %葡萄糖注射液水化后形成的微乳,在12 h内可以释放80 %以上的药物,对其释放行为进行方程拟合发现,Peppas方程能较好的模拟TEN-SEDDS的体外释放过程(SMEDDS,R=0.9583),说明该系统中药物释放符合扩散和溶蚀相结合的释放机制。建立了药物含量测定方法及有关杂质限度检查方法,同时进行了影响因素试验,试验结果表明,高温使得制剂颜色变深,有关杂质增多,光照使得制剂中药物含量下降,有关杂质增多,说明该制剂最好在低温避光条件下贮存,为加速试验和长期试验条件的选择提供了参考。以鼠源胶质瘤细胞C6和人源胶质瘤细胞U87作为肿瘤细胞模型,从细胞毒、细胞凋亡和细胞周期三方面,对TEN-SMEDDS的体外抗肿瘤活性进行了评价。细胞毒试验结果表明,对于C6和U87两种细胞,TEN-SMEDDS组的IC50值分别为 0.818±0.033 μg/mL 和 9.143±3.060 μg/mL,均高于 VUMON 组(0.386±0.024 μg/mL 和 4.473±1.819 μg/mL),即 TEN-SMEDDS 的细胞毒性比VUMON低,C6对药物的敏感性比U87细胞高;对两种制剂中的辅料进行细胞毒性考察发现,VUMON中的辅料比TEN-SMEDDS中的辅料对细胞的毒性强。细胞凋亡试验结果表明,TEN-SMEDDS诱导细胞凋亡的作用比VUMON略强,但是二者对C6细胞和U87细胞凋亡的影响没有显著性差异;两种制剂诱导C6细胞凋亡的比例约为U87细胞的2倍,说明C6细胞比U87细胞对替尼泊苷更敏感,这与细胞毒试验中的结果一致。细胞周期试验结果表明,TEN-SMEDDS和VUMON主要阻滞C6细胞于G2/M期,主要阻滞U87细胞于S期,说明替尼泊苷为周期特异性药物,不同的制剂形式对替尼泊苷的周期特异性无影响,由于C6和U87细胞来源不同,替尼泊苷对细胞的阻滞作用也有所不同。药物动力学与组织分布试验结果表明,与VUMON相比,TEN-SMEDDS的Cmax与AUC显著降低(p<0.05),而Vd和CL显著增大(p<0.05);在5～120min内,大部分组织中,TEN-SMEDDS组的药物浓度都比VUMON组的高,尤其是在肝、脾和肺中,在脑部的分布比VUMON组略高,但无显著性差异(p>0.05),提示我们,SMEDDS使得药物暴露在血液中的浓度降低,降低了系统毒性,如血液毒性和骨髓抑制,能够较快速的分布到各组织中,相对更易于蓄积到巨噬细胞丰富的组织中,有可能增加药物在肿瘤中的分布。分别以皮下接种U87的BALB/c裸鼠和接种C6的Wistar大鼠作为动物模型,进行了 TEN-SMEDDS的药效学研究。结果表明,TEN-SMEDDS能够显著抑制肿瘤生长,但是其抑瘤效果与VUMON无显著性差异;TUNEL法检测肿瘤组织凋亡的结果显示,TEN-SMEDDS具有明显的诱导细胞凋亡的作用,药效学研究结果与体外抗肿瘤活性评价中的结果一致,即TEN-SMEDDS与VUMON对C6细胞和U87细胞的增殖和凋亡的影响无显著性差异。在TEN-SMEDDS的安全性的初步研究中,主要考察了该制剂的溶血性,刺激性和过敏性。溶血性试验中,通过肉眼观察发现,TEN-SMEDDS在3 h内不会引起溶血和凝聚,3 h观察期结束后紫外分光光度法测定的各制剂各浓度的溶血率均<5 %,但TEN-SMEDDS制剂组的溶血率较VUMON组显著降低(p<0.05)。血管刺激性试验中,给药期间,肉眼观察发现,5 %葡萄糖组、VUMON组和TEN-SMEDDS组动物整体无异常症状,5 %葡萄糖组给药部位无明显症状,VUMON组及TEN-SMEDDS组给药部位均出现轻微溃烂;给药后组织切片显微镜下观察发现,5 %葡萄糖组和TEN-SMEDDS组均没有出现了明显的病变,而VUMON组的给药部位和周围组织则出现了轻微的充血、红细胞聚集和周围组织不规则等现象;各组均未出现明显的出血,血栓、坏死和炎症细胞浸润等病理变化。以豚鼠作为试验动物模型进行的过敏性试验结果表明,激发之前,各组豚鼠均无全身过敏反应症状,各组体重无显著性差异(p>0.05);激发后的30 min内,阴性对照组和空白SMEDDS组无任何过敏反应症状,TEN-SMEDDS组豚鼠出现轻微躁动,BSA组全部死亡;VUMON空白制剂组和VUMON组表现为搔鼻,打喷嚏,焦虑,竖毛或抽搐,甚至出现排便排尿等现象,按照过敏反应标准进行划分,空白SMEDDS组,TEN-SMEDDS组,空白VUMON组和VUMON组分别为0,1,3和3级,说明TEN-SMEDDS不会引起过敏反应,而VUMON在临床上所出现的过敏反应主要是由于制剂中的辅料所引起的。综上所述,本课题成功制备了TEN-SMEDDS,从制剂学表征、理化性质、体外抗肿瘤活性、药物动力学及组织分布、药效学和安全性等方面进行了评价,说明本制剂能够满足临床要求,具有与VUMON相同的药效,但是其在水化后的稳定性显著提高,即提高了替尼泊苷制剂在输注过程中的稳定性,避免了Cremophor EL所引起的过敏反应,提高了替尼泊苷制剂的安全性。