目的：探讨缝隙连接在同型半胱氨酸（Hcy）和转化生长因子β₁（TGF-β₁）介导大鼠血管平滑肌细胞增殖中作用及机制。方法：（1）用组织贴块法原代培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMC），用胰蛋白酶消化法进行细胞传代培养，α-平滑肌肌动蛋白（α-Actin）相关抗原鉴定。取3-5代细胞，MTT法检测不同浓度Hcy（0、0.01、0.025、0.05、0.1、0.2、0.5mmol/L）和不同浓度TGF-β₁（0、0.01、0.1、1、10ng/mL），作用不同时间（0、12、24、48、72h）对VSMC增殖的影响，确定Hcy和TGF-β₁作用浓度和作用时间，然后分8组：Control组、Hcy组、TGF-β₁组、Hcy+TGF-β₁组、缝隙连接阻断剂（18α-GA）组、Hcy+18α-GA组、TGF-β₁+18α-GA组和Hcy+TGF-β₁+18α-GA组；（2） MTT法及流式细胞仪检测大鼠VSMC增殖活性；（3）免疫荧光技术观察大鼠VSMC中Cx43、Cx40蛋白表达及定位；（4）Western blotting技术检测大鼠VSMC中Cx43、Cx40蛋白表达；（5）染料示踪分子传递法（划痕标记染料传输法）检测大鼠VSMC缝隙连接功能。（6）实验数据用均数±标准差表示，组间比较用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK法检验。所有数据采用SPSS13.0统计软件包进行分析，以P<0.05表示差异有统计学意义。结果：（1）大鼠VSMC中Cx43与Cx40蛋白表达呈阳性，两者共定位于胞浆。（2） MTT法检测不同浓度Hcy、TGF-β₁，不同作用时间对大鼠VSMC增殖影响的结果发现：Hcy对大鼠VSMC的增殖呈现时间依赖性，随时间延长VSMC增殖增加。不同浓度Hcy对VSMC增殖的影响呈现出复杂的效应。与Control组相比，低浓度时（0.01mmol/L）抑制增殖，至0.025mmol/L时，促进增殖；0.05mmol/L时，增殖减缓；至高浓度（0.1mmol/L），增殖最大；浓度进一步升高至0.2mmol/L、0.5mmol/L时，增殖趋势变缓。Hcy浓度0.1mmol/L在24h时，与其他各浓度均有统计学差异，增殖最显著。TGF-β₁对大鼠VSMC增殖的影响呈现时间依赖性和浓度依赖性。随时间延长VSMC增殖增加。浓度为0.01ng/mL和0.1ng/mL时，与control组相比无统计学差异；至1ng/mL、10ng/mL时，增殖显著，且10ng/mL和1ng/mL相比，在24h和48h时增殖更显著。（3） MTT法检测不同处理因素对大鼠VSMC增殖影响的结果发现：与Control组相比，Hcy组、TGF-β₁组VSMC A₅₇₀值增加显著（P<0.05），18α-GA组VSMC A₅₇₀值减少（P<0.05）；与Hcy组相比，Hcy+18α-GA组VSMC A₅₇₀值减少（P<0.05）；与TGF-β₁组相比，TGF-β₁+18α-GA组VSMC A₅₇₀值减少（P<0.05）；与Hcy组、TGF-β₁组相比，Hcy+TGF-β₁组VSMC A₅₇₀值减少（P<0.05）。（4）细胞周期检测：与Control组相比，Hcy组VSMCS值增加显著（P<0.05），TGF-β₁组VSMC S值有增加趋势，但无统计学差异。18α-GA组VSMC S值减少（P<0.05）；与Hcy组相比，Hcy+18α-GA组VSMC S值降低（P<0.05）；与TGF-β₁组相比，TGF-β₁+18α-GA组VSMC S值降低（P<0.05）；与Hcy组、TGF-β₁组相比，Hcy+TGF-β₁组VSMC S值降低（P<0.05）。（5）Western blotting检测发现：①各组间Cx40表达的变化：与Control组相比，Hcy组、TGF-β₁组表达增强（P<0.05），18α-GA组无显著差异（P>0.05）；与Hcy组相比，Hcy＋18α-GA组表达减弱（P<0.05），Hcy+TGF-β₁组表达减弱（P<0.05）；与TGF-β₁组相比，TGF-β₁+18α-GA组表达减弱（P<0.05），Hcy+TGF-β₁组表达减弱（P<0.05）。与Hcy+TGF-β₁组相比，Hcy+TGF-β₁+18α-GA组表达减弱（P<0.05）。②各组间Cx43表达的变化：与Control组相比，Hcy组、TGF-β₁组表达增强（P<0.05），18α-GA组无显著差异（P>0.05）；与Hcy组相比，Hcy＋18α-GA组表达减弱（P<0.05），Hcy+TGF-β₁组表达减弱（P<0.05）；与TGF-β₁组相比，TGF-β₁+18α-GA组表达减弱（P<0.05），Hcy+TGF-β₁组表达减弱（P<0.05）。与Hcy+TGF-β₁组相比，Hcy+TGF-β₁+18α-GA组表达无显著差异（P>0.05）。③各组间磷酸化Cx43（P-Cx43）与非磷酸化Cx43（NP-Cx43）比值变化：与Control组相比，Hcy组表达无显著差异（P>0.05），TGF-β₁组表达减弱（P<0.05），18α-GA组显著减弱（P<0.05）；与TGF-β₁组相比，TGF-β₁+18α-GA组表达减弱（P<0.05）。（6）划痕标记染料传输法检测发现：与Control组相比，Hcy组明显增强（P<0.05），TGF-β₁、Hcy+TGF-β₁组差异无统计学意义（P>0.05），18α-GA组显著减弱（P<0.05）；与Hcy组相比，Hcy＋18α-GA组减弱（P<0.05），Hcy+TGF-β₁组减弱（P<0.05）；与TGF-β₁组相比，TGF-β₁+18α-GA组减弱（P<0.05），Hcy+TGF-β₁组无显著差异（P>0.05）。与Hcy+TGF-β₁组相比，Hcy+TGF-β₁+18α-GA组减弱（P<0.05）。结论：（1） TGF-β₁主要通过上调大鼠血管平滑肌细胞Cx40、Cx43蛋白表达及抑制Cx43蛋白磷酸化，从而促进了大鼠血管平滑肌细胞的增殖；（2） Hcy主要通过上调大鼠血管平滑肌细胞Cx40、Cx43的蛋白表达，引起缝隙连接通讯功能的增强，促进了大鼠血管平滑肌细胞的增殖；（3） TGF-β₁和Hcy联合作用可能通过下调大鼠血管平滑肌细胞Cx40、Cx43蛋白表达，对大鼠血管平滑肌细胞增殖具有负协同作用。