链格孢霉毒素是由链格孢菌属产生的一类具有诱变性、基因毒性、致癌致畸毒性及急性毒性等毒性的次级代谢产物,其中主要的代谢产物有链格孢酚(AOH)、交链格孢酚单甲醚(AME)、交链孢烯(ALT)、链格孢菌毒素I,II,III(ATX-I,ATX-II,ATX-III)、细交链格孢菌酮酸(Te A)和腾毒素(Ten)等。柑橘是世界上最重要的农产品和经济作物之一。我国柑橘的种植面积和年产量目前均居世界首位。柑橘在生长、采收、贮藏、运输和销售等各个过程,均易受到霉菌污染继而产生并积累展青霉素、链格孢霉毒素等各种真菌毒素,对柑橘鲜果食用和柑橘类果汁加工以及柑橘皮渣利用等都存在重大的安全隐患,严重影响柑橘及其加工制品、副产品的安全食用,危害消费者的生命和健康。近两年链格孢菌等引起柑橘褐斑病、黑腐病等严重病害及链格孢霉毒素对柑橘食用安全产生的危害引起各国研究者的热切关注,但目前国内外仍没有链格孢霉毒素相关的限量标准和系统研究,因此研究柑橘中的链格孢霉毒素对其限量标准的制定和风险评估等方面都具有重要的科学意义和现实意义。本论文研究建立了易污染柑橘的链格孢酚、交链格孢酚单甲醚、交链孢烯、腾毒素及细交链格孢菌酮酸5种链格孢霉毒素的Qu ECh ERS-超高效液相色谱串联质谱快速检测方法,开展了重庆市柑橘中的链格孢霉毒素的污染情况调查及抽样监测分析,并以不同品种柑橘为研究对象,研究了人工纯种霉菌接种后不同品种柑橘果实中5种链格孢霉毒素的产生规律和鲜果不同部位的分布情况。具体研究内容和研究结果如下:1.建立了Qu ECh ERS-超高效液相色谱串联质谱法快速检测柑橘中Ten、ALT、AOH、AME和Te A 5种链格孢霉毒素的方法。待测样品经改进的Qu ECh ERS前处理方法一步完成萃取净化,采用乙腈(1.5%甲酸)提取,无水Mg SO4和Na Cl盐析,以ACQUITY UPLC BEH C18液相色谱柱为分离柱,用乙腈和0.1%甲酸水溶液进行梯度洗脱,电喷雾正离子(ESI+)多反应模式监测,超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)测定,外标法定量。在该方法条件下,5种链格孢霉毒素分离效果良好,在2.0~100μg/L浓度范围内均有良好的线性关系,R2>0.99,检出限在0.11~0.91μg/kg之间。在5、20和100μg/kg三个水平下加标5种毒素的加标回收率在71%~112%范围内,相对标准偏差为1.08%~9.87%,能满足柑橘中真菌毒素检测的要求。2.对重庆柑橘主产地区果园以及各大超市采集的不同柑橘品种共计113批次样品中的5种链格孢霉毒素的污染水平开展了监测分析。其主要研究结果如下:(1)5种链格孢霉毒素在柑橘样品中的总检出率为27.43%,总含量范围在2.14~66.55μg/kg之间,检出平均含量为12.70μg/kg;Te A、Ten和AOH的检出率和检出含量均比较高,其中Ten的检出率最高,可达15.93%,Te A的检出含量最高,可达66.55μg/kg。(2)市场和基地果园两类样本来源均有部分柑橘样品中能检出各种链格孢霉毒素。其中市场取样的宽皮柑橘检出率高于基地采样,而基地采集的其他品种的柑橘的检出率和检出含量均高于市场取样。(3)链格孢霉毒素检出平均总含量较高的是宽皮柑橘和柚类,其中5种链格孢霉毒素在宽皮柑橘中均有检出,检出率34.88%,含量范围在2.24~66.55μg/kg之间,检出平均总含量为11.54μg/kg。3.研究了不同柑橘品种人工接种链格孢菌属(Alternaria alternate)后,病斑部位全果、病斑部位之外的健康部位果皮和果肉中5种链格孢霉毒素的产生变化和分布规律。结果表明:(1)在接种5天时,不同柑橘品种果实发病部位中均产生了Ten、ALT、AME、AOH和Te A,在整个发病过程中,病变部位中Te A产生和累积速度最快,检出含量最高(可达55880.71μg/kg)。不同柑橘品种经过纯种链格孢菌人工接种后的产生链格孢霉毒素含量的的能力不同,最终含量高低顺序为:温州蜜柑>红橘>锦橙>柠檬>宜昌橙>葡萄柚。(2)柑橘品种中发病部位(全果,包括果皮和果肉)、健康部位果皮和健康部位果肉中的5种链格孢霉毒素含量随着病斑直径的扩大逐渐增加,其中在发病部位的含量范围为0~55880.71μg/kg,在健康部位果皮的含量范围为0~26336.65μg/kg;在健康部位果肉的含量范围为0~40677.65μg/kg。同时也发现橙类和柚类的果皮抗菌能力强,宽皮柑橘抗性弱。研究表明,由于柑橘感染产毒链格孢菌后产生的毒素会从病斑部位扩散到周围健康部位进而累积,因此,在鲜食加工和风险评估中应引起关注和重视。