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目的 通过小鼠体外毛囊培养，探讨复方米诺地尔制剂中米诺地尔和人参提取物的最佳浓度；采用离体小鼠皮肤，应用透皮吸收扩散装置，考察氮酮作为复方米诺地尔促渗剂的最佳浓度；利用整体动物试验，研究复方米诺地尔促进鼠毛生长的最佳组方；通过对动物的皮肤急性毒性试验、皮肤刺激性试验及皮肤过敏性试验观察复方米诺地尔的安全性，为临床用药提供依据。方法1 毛囊的常规培养：于解剖显微镜下，选取C57BL／6J小鼠完整的生长期毛囊，放入含米诺地尔4种浓度和人参提取物6种浓度以及含米诺地尔和人参提取物9种浓度组方的Willimas E培养基中，在37℃、5％CO2条件下孵育7天，每24小时测量毛干长度1次。 2 毛囊的3H-TdR掺入培养：方法同上。培养24小时后，每孔均掺入3H-TdR 50μL（0.5gCi），再培养20小时后取出毛囊，PBS冲洗3遍（约30min），用10％的三氯醋酸冰浴条件下固定毛囊2遍（共20min），冰水浴条件下固定毛囊1遍（约10min），0.3 mol／L NaOH 37℃水浴锅内消化至毛鞘全部溶解（约30h），将上清液用ZT—Ⅲ型多孔细胞收集器收集细胞于999型纤维膜上，红外线烤干加闪烁液，于LS-6500液闪计数仪上测量。 3 复方米诺地尔透皮吸收的研究：应用透皮扩散装置。将离体小鼠背部第四军医大学硕士学位论文皮肤固定于接收池上，皮肤内层朝向接收池，接收池内置生理盐水，释放池内分别为含有不同浓度氮酮的复方制剂液。将其置于恒温水浴振荡器上，控制水浴温度（36.5士0.SOC），于2、4、8、10、12和24h分别取样0.smL，同时补充同等量的生理盐水。接受液以7000g/min离心1 omin，取上清液20协L进样。 4药效学研究:于给药前24h用8%硫化钠溶液脱去小鼠背部皮肤上的毛。将不同浓度配方的药物按每次O.lmL，每天两次，均匀涂抹于小鼠背部脱毛区，连续涂抹两周，观察脱毛区鼠毛生长情况。 5安全性实验 5.1皮肤急性毒性试验:于给药前24h用8%硫化钠将家兔背部脊柱两侧毛脱掉。将受试药、对照药溶液各ZmL分别涂抹于家兔背部完整皮肤和破损皮肤。给药后24h用温水去除受试物;于去除受试物后1、24、48、和72h至7d观察家兔涂抹部位及全身反应情况。 5.2皮肤刺激性试验:脱毛方法同上。采取自体左右对照。将受试药、对照药溶液各lmL涂抹于家兔背部完整皮肤和破损皮肤。接触24h后用温水洗去皮肤上残留药物。观察有无红斑和水肿;然后每天涂抹一次，连续一周，于末次去除受试物后1、24、48和72h至7d连续观察涂抹部位有无红斑和水肿等情况。 5.3皮肤过敏性试验:脱毛方法同上。①致敏接触:分别给予受试药溶液、对照药溶液和1%2，4一二硝基氯代苯溶液各0.2mL分别涂于各组豚鼠的背部左侧脱毛区，药物与皮肤接触6h、7d和14d以同样方法重复一次。②激发接触:于末次涂药后14d，将试验药溶液、对照药溶液和0.1%2，4一二硝基氯代苯溶液各0.2mL涂于背部右侧脱毛区。药物与皮肤接触6h后用温水洗去皮肤上残留药物，即刻观察，去除受试物后于24、48和72h再观察皮肤有无红斑、水肿等过敏反应。结果1毛囊常规培养和3H一TdR掺入培养:单独应用米诺地尔，浓度为0.05一0.10ol几时具有促毛囊生长的作用，其中浓度为o.05mmol几时促毛囊生长的效果最好;单独应用人参提取物，浓度为0.005一0.100留L时具有促第四军医大学硕士学位论文毛囊生长的作用，其中浓度为0.100叭时促毛囊生长的效果最好。米诺地尔和人参提取物的组方中，人参提取物浓度为0.05岁L与米诺地尔浓度为o.olmmol/L和0.05ol/L配伍，促进毛囊生长的效果最好。 2透皮吸收:分别应用人参皂普Rgi和米诺地尔的标准曲线方程计算其累积透皮吸收量。从而得出不同浓度氮酮促进人参皂昔Rgl的透皮吸收能力由大到小依次为5%，3%，1%，7%，9%，O%;促进米诺地尔的透皮吸收能力由大到小依次为3%，5%，1%，0%，7%，9%。5%和3%氮酮促进人参皂普Rgl透皮作用无统计学上差异;3%氮酮促进米诺地尔透皮作用与其余各浓度有差异;因此综合考虑选择3%的氮酮作为复方米诺地尔的促渗剂。 3药效学研究:各药物组与对照组相比均有促进鼠毛生长的作用，而1%米诺地尔+l .5%人参提取物组与各药物组比较有统计学差异。故得出1%米诺地尔+l .5%人参提取物组对毛发的生长效果最好。 4安全性试验:家兔皮肤急性毒性试验中，复方米诺地尔的剂量为临床人拟用量的50倍时未见毒性反应;在皮肤刺激性试验和皮肤过敏性试验中，复方米诺地尔采用临床人拟用量药物浓度时未见刺激性和过敏性反应。结论1小鼠毛囊体外培养显示，0.05留L人参提取物和0.01ol/L或0.05mmol几米诺地尔配伍对促进毛囊生长的效果最好。 23%的氮酮作为复方米诺地尔的促渗剂作用最佳。 3以1%米诺地尔+1 .5%人参提取物配伍促进鼠毛生长的疗效最好。 4通过对动物皮肤的急性毒性试验、过敏性试验和刺激性试验证明，应用复方米诺地尔是安全的。