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布氏杆菌病（Brucellosis）是由布氏杆菌（Brucella）引起的人、畜共患传染病，在我国被列为二类传染病。本试验应用布氏杆菌常规鉴定分型方法，如生化试验、噬菌体试验，结合Abortus Melitensis Ovis Suis PCR（AMOS-PCR）方法对现有布氏杆菌进行种型的鉴定，结果与薛红梅等实验室的试验结果一致。进一步确定本次试验对象的可靠性。 根据已发表的羊种布氏杆菌外膜蛋白Omp22、Omp15、Omp2b和 Omp31的核苷酸序列设计引物，以羊种布氏杆菌3型青海省海晏县分离株为研究对象，从其基因组中扩增出Omp22、Omp15、Omp2b、Omp31基因。通过T4DNA连接酶成功的将扩增基因片段克隆到pMD19-T载体上。利用生物信息学软件对测序结果进行分析，结果表明青海羊3型布氏杆菌与已知羊种布氏杆菌Omp22、Omp15、Omp2b、Omp31的同源性分别达到99.84％、96.72%、100%和100%，其中Omp22的第461个碱基G突变为C；Omp15的7处突变，表现为6处AA碱基的增添和第388个碱基C突变为T；另对羊种布氏杆菌3型的Omp22、Omp15、Omp2b和 Omp31分子中可能成为其抗原决定簇的区段进行预测，结果为Omp22分子的28aa～40aa和109aa～121aa、Omp15分子的42aa～49aa和77aa～83aa、Omp2b分子的178aa～190aa和251aa～262aa、Omp31分子的7aa～16aa和102aa～111aa区段成为其蛋白分子抗原决定簇的可能性很大。 用限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ、BamHⅠ和EcoRⅠ、XhoⅠ和NdeⅠ分别酶切相应蛋白的重组克隆质粒和原核表达载体 pGEX-4T-1、pET28b（+），经连接、转化后成功构建了外膜蛋白Omp22、Omp2b、Omp31和Omp15重组表达质粒，经测序有正确读码框。经IPTG诱导表达，Omp22、Omp15和Omp31的表达融合蛋白分子量分别约为48kDa、41kDa、28kDa，Omp2b诱导表达效果不好。用兔/豚鼠的布氏杆菌阳性血清为一抗，HRP标记的山羊抗兔/豚鼠 IgG为二抗，进行Western-blot检测，证明了Omp22、Omp15和Omp31蛋白的反应原性。 此研究为大量制备重组蛋白及其免疫原性及相关功能研究奠定基础，也为布氏杆菌病的诊断、用药及疫苗研究提供线索。