人参皂苷的提取与化学转化研究

来源 :长春中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:testsininet
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目的:首先建立常温条件下提取人参皂苷的超声和仿生方法。优化两种方法的提取条件,以人参中八种人参皂苷(Rg1、Rd、Rf、Re、Ro、Rc、Rb1、Rb2)的含量为指标,利用高效液相色谱-质谱联用技术定量分析,评价建立的两种方法的人参皂苷提取效率。进一步基于液质联用技术建立分析人参皂苷化学转化产物的方法,明确原人参二醇型和原人参三醇型皂苷转化的途径。最后将提取的人参皂苷转化为稀有人参皂苷,并快速分析转化产物结构。方法:利用胃蛋白酶、胰酶等试剂配制人工胃液、人工肠液,模拟人体胃肠道环境用于提取人参中的人参皂苷。考察模拟环境、时间、温度等因素对提取人参皂苷提取效率的影响。以甲醇作为提取溶剂超声提取人参中的人参皂苷,考察提取时间、料液比、甲醇浓度等因素对提取率的影响。利用高效液相色谱-三重四极杆质谱的多反应监测(MRM)模式精确定量分析八种人参皂苷的含量,对建立的人参皂苷仿生提取方法进行方法学考察。以12-磷钨酸作为催化剂转化原人参二醇型皂苷Rd和Rg3、原人参三醇型皂苷R1以及仿生提取的人参总皂苷,通过HPLC-ESI-MSn液质联用技术分析转化产物结构。结果:在相同的提取时间内,建立的仿生提取方法提取八种人参皂苷的含量明显高于超声方法,显示出了更好的提取效率。HPLC-ESI-MSn分析结果显示,人参皂苷Rd被转化为10种产物:20(S)-25-OH-Rg3、20(R)-25-OH-Rg3、25-OH-Rk1、25-OH-Rg5、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、(20S,25)-环氧-Rg3、(20R,25)-环氧-Rg3、Rk1、Rg5。人参皂苷Rg3的转化产物与Rd相同。原人参三醇型皂苷R1有9种产物生成:20(S)-25-OH-R2、20(R)-25-OH-R2、25-OH-T5、20(S)-R2、20(R)-R2、20(S)-25-epoxy-R2、20(R)-25-epoxy-R2、T5、(20E)-3β,12β-二羟基-6α-(2-O-β-D-吡喃木糖基-β-d-吡喃葡糖氧基)达玛烷-20(22),24-二烯。仿生提取人参总皂苷经转化后主要观察到12种:20(S)-Rf3、20(R)-Rf3、20(S)-Rf2、20(R)-Rf2、20(S)-Rg2、20(R)-Rg2、20(S)-25-OH-Rg3、20(R)-25-OH-Rg3、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1、Rg5。结论:与超声提取法相比,以人工胃液作为仿生提取溶液的仿生提取方法显示出更高的提取效率。结合高效液相质谱定量分析技术可以看出,建立的仿生提取方法在人参皂苷常温提取、定量分析方面显示出了良好的精密度,准确性,可作为人参皂苷提取分析新的补充方法。进一步研究发现,仿生提取的人参总皂苷可以被转化为多种稀有人参皂苷,利用HPLC-ESI-MSn液质联用技术可以快速准确的分析转化产物的结构,为稀有人参皂苷的制备建立了基础。
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