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现今在民族文化与医药的研究领域,大多只是针对二者之一进行纵向研究。虽然也有部分文献阐述了两者的关系,但叙述都较为模糊,难以发掘出土家族文化与土家族医药体系的具体联系。本课题组在文献研究过程中发现土家族文化与土家族医药间其实存在许多共通点,因此整理、分类、分析这些民族文化资料及医药知识具有极其重要的学术研究意义,同时也是对民族非物质文化遗产的继承与保护。本研究内容主要分为五点:前言主要介绍了本部分的研究背景、研究意义以及研究方法;第一章通过介绍土家族的文化背景及民族文化,初步构建了土家族文化体系;第二章主要阐述了土家族医药的医学理论与药学理论,初步构建了土家族医药体系;第三章从土家族的文化背景及土家族民族文化对土家族医药的影响两个方面进行横向研究,分析土家族文化体系对土家族医药体系的影响;小结部分是总结土家族文化对土家族医思想及医药特点的影响,并指出全文不足之处。目的:通过建立人肝癌BEL-7402细胞BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型,探讨土家药蜚蠊提取物对移植瘤的生长、血管新生作用,并以P53/Gadd45α轴及其相关因子HIF-1a、NF-κB、STAT3、VEGF为切入点,明确其对肝癌微血管生长因子VEGF的影响机制,为中药治疗肝癌寻找新的途径,为民族药的开发利用奠定科学基础。方法:建立人肝癌BEL-7402细胞皮下移植模型,造模完成后,随机将30只荷瘤小鼠分为:模型组(Control)、5-FU阳性对照组(5-FU)、蜚蠊提取物高剂量组(Fei Lian High,FLH)、蜚蠊提取物中剂量组(Fei Lian Medium,FLM)、蜚蠊提取物低剂量组(Fei Lian Low,FLL),每组6只;同时,选取6只与造模裸鼠同样条件的正常裸鼠作为正常组(Normal)。Normal、Control组予以生理盐水0.2 ml/次/d灌胃;5-FU组予以3.03g/kg的5-FU注射液0.2 ml/次/d腹腔注射,隔2d给药 1 次;FLH、FLM、FLL 组分别予以 10.4 g/kg、7.8 g/kg、5.2 g/kg 的蜚蠊提取物水溶液0.2 ml/次/d灌胃,连续给药2周。一般指标观察:①每天观察并记录裸鼠的一般情况,隔2天用电子称测量一次体质量②用电子游标卡尺测量计算移植瘤体积及抑瘤率③给药完成后,用眼球取血法取得裸鼠全血,然后脱颈处死小鼠,完整摘除小鼠肝脏,剥离皮下移植瘤,观察对比各组移植瘤形态。病理组织学观察:①HE染色观察裸鼠肝脏及移植瘤微观结构;②比色法检测裸鼠全血血清中肝功能指标ALT、AST、GGT、GST的表达水平;③SABC法检测移植瘤中微血管密度MVD;④免疫组织化学法检测移植瘤中P53、Gadd45α、NF-κB、STAT31-STAT3、HIF-1a和VEGF蛋白的阳性表达情况;(1)Western blot法检测移植瘤中 P53、Gadd45α、NF-κB、STAT3、p-STAT3、HIF-1a 和 VEGF 蛋白的表达水平;⑥ELISA法检测裸鼠血清中VEGF的表达水平。结果:一般指标:①裸鼠体质量方面,与Normal组相比,Control组裸鼠体重显著减轻(P<0.05);与Control组相比,5-FU组裸鼠体重显著减轻,FLH、FLM、FLL组裸鼠体重显著增加(P<0.05)。②移植瘤体积方面,与Control组相比,5-FU组、FLH、FLM、FLL组裸鼠的移植瘤体积显著降低(P<0.05)。各组裸鼠的移植瘤体积抑瘤率分别是:5-FU组(43.52%)、FLH组(35.15%)、FLM组(19.91%)、FLL组(16.45%)。病理组织学指标:①HE结果发现,Control组裸鼠癌细胞巢团较大,可见微量肿瘤坏死灶,细胞形态良好;5-FU、FLH组可见大片癌细胞巢团伴大片血管坏死,坏死细胞较多,FLM、FLL组仅有少量肿瘤坏死灶,坏死细胞较少;肝脏方面,Normal、Control、FLH、FLM、FLL组裸鼠肝脏均正常,5-FU部分区域出现炎性细胞浸润,肝细胞水肿及轻度纤维化。②比色法结果显示,与 Normal 组相比,Control 组 ALT、AST、GGT、GST 无显著差异(P>0.05);与Control组相比,5-FU组ALT、AST、GGT、GST均显著升高(P<0.05)。③SABC染色提示,与Control组相比,5-FU、FLH、FLM、FLL组MVD均显著降低(P<0.05)。④免疫组织化学法检测结果提示,P53、NF-κB、p-STAT3、HIF-1a和VEGF蛋白在Control组呈强阳性表达(+++),在5-FU、FLH组呈弱阳性表达(+),在FLM、FLL组呈阳性表达(++),STAT3蛋白在Cont:rol、5-FU、FLH、FLM、FLL组均呈强阳性表达(+++),Gadd45α蛋白在Control组呈弱阳性表达(+),在5-FU、FLH组呈强阳性表达(+++),在FLM、FLL组呈阳性表达(++)。(1)Western blot检测结果显示,与Control组相比,5-FU、FLH、FLM、FLL组裸鼠移植瘤中P53、NF-κB、p-STAT3、HIF-1a和VEGF蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05),Gadd45α蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),STAT3蛋白表达水平无显著差异(P>0.05)。⑥ELISA结果提示,与Normal组比较,Control组裸鼠血清中的VEGF蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与Control组比较,5-FU、FLH、FLM、FLL组裸鼠血清中的VEGF蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:(1)土家药蜚蠊提取物具有增加人肝癌BEL-7402细胞建立的BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型的体重、抑制皮下移植瘤生长及移植瘤血管生成的作用,其抑制肝癌肿瘤生长的机制可能是通过抑制血管新生来实现的;(2)裸鼠皮下移植瘤模型短期采用土家药蜚蠊提取物灌胃对其肝脏没有明显肝毒性。(3)土家药蜚蠊提取物可以下调人肝癌BEL-7402细胞建立的BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型的移植瘤中P53、NF-κB,p-STAT3、HIF-la、VEGF的蛋白表达水平;上调Gadd45α的蛋白表达水平;下调模型血清中VEGF的蛋白表达水平。说明蠊提取物可能是通过P53/Gadd45α轴,下调VEGF的蛋白表达,从而抑制肝癌血管新生。