四川地区猪δ冠状病毒分子流行情况及间接ELISA方法的建立与应用

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:limingxhss2
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)是冠状病毒科的新成员,能够引起母猪和哺乳仔猪发生腹泻、呕吐、脱水等临床症状,哺乳仔猪的死亡率可达40%,是危害养猪业的严重疫病之一。为了解PDCoV在四川地区的分子流行情况,本研究从四川各地区猪场收集的共计634份临床腹泻样本进行RT-PCR检测,并通过对4株四川地区的PDCoV病毒株进行全基因扩增与分析,以了解四川PDCoV病毒株的基因组与遗传系统发育特征。结果显示腹泻猪群中PDCoV的阳性率较低,仅为13.25%(84/634),而猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的阳性率高达32.18%(204/634),同时结果显示PDCoV可与PEDV混合感染猪群,且阳性率为7.14%(47/634)。另外统计学分析显示PDCoV感染仔猪的几率比母猪高约2.77倍,且猪群在春季和冬季发生PDCoV感染的几率要比夏季高约3.30倍。全基因组测序分析显示4株PDCoV病毒株之间的同源率为98.9%-99.3%,而与其它参考PDCoV病毒株间的同源率为97.6%~99.0%。4株PDCoV的全基因组中均有部分碱基的插入或缺失,包括非结构基因2(non-structural gene 2,ns 2)上的6-nt的缺失、ns 3基因的9-nt插入、S基因的3-nt缺失以及独特的3′UTR的11-nt缺失。全基因遗传进化树分析显示,PDCoV病毒株呈现出明显的地域特征,同时4株PDCoV病毒株与其他中国PDCoV病毒株处于同一大分支,但又各自处在不同的2个小分支中。同时S基因遗传进化树分析显示测序的其中1株病毒株与其他国家PDCoV病毒株组成一个大分支,表明四川地区PDCoV病毒株的基因多样性。本研究丰富了PDCoV在中国的分子流行特征及其遗传进化规律,为后续PDCoV病毒学研究提供参考。另外本研究为建立了一种可靠的检测PDCoV IgG抗体的间接ELISA方法,以了解四川地区PDCoV抗体的流行情况。本研究采用原核表达系统表达PDCoV膜蛋白(M)作为检测抗原,通过反应条件的优化,建立了基于PDCoV M蛋白的间接ELISA方法,命名为PDCoV-r M-ELISA,并用该方法对430份临床样品进行检测。结果显示本研究成功构建了重组表达菌BL21-pET-32a-M,且将重组表达菌经诱导表达后获得了重组M蛋白,Western bolt检测表明重组蛋白具有良好的反应原性。以其作为包被抗原建立的PDCoV-r M-ELISA方法仅对PDCoV血清检测为阳性,与猪流行性腹泻病毒等5种猪常见病原阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性;该方法灵敏性高、重复性好,批间和批内重复性变异系数均小于10%;与成品化PDCoV抗体检测试剂盒同时检测48份临床血清,两种方法的阳性符合率为88.46%,阴性符合率为90.91%,总符合率为89.58%。临床样品检测结果表明四川地区PDCoV抗体阳性率平均为11.86%,且结果显示在健康猪血清中也可检测出抗体。总之,本研究成功表达了PDCoV M蛋白,建立了PDCoV-r M-ELISA检测方法,该方法具有较高的敏感性,良好的特异性和重复性,可用于临床猪血清样品种PDCoV IgG抗体的检测。
其他文献
应激刺激对痛觉反应具有调控作用。根据应激源持续时间和强度的不同,应激可以分为急性应激(acute stress,AS)和慢性应激(chronic stress,CS),一般情况下,AS可以使机体产生镇痛(stress-induced analgesia,SIA)现象,而CS则可以使机体产生痛觉敏化(stress-induced hyperalgesia,SIH)现象。除此之外,还有研究发现,应激和
由于马尾松人工林大多数都为同龄人工纯林,其林分结构和密度不合理,导致生物数量和多样性的减少、病虫害加重、地力衰退以及生态系统功能下降。因此,亟需对马尾松人工林进行林分结构调整,这对于增加人工林林分的稳定性,增强林地生态系统功能具有重要意义。本研究通过深入探讨不同的经营方式和采伐强度对马尾松人工林林分结构的影响,以期为马尾松人工林结构的优化和质量的提升提供科学依据。以大茅坪国有林场内4种经营方式马尾
精子发生是决定精液质量的关键,与受精率的高低密切相关,受多种因素的影响,不同品种间精子发生过程通常存在较大差异。四川白鹅与朗德鹅虽同属中型鹅种,但配种能力存在差异,可能与它们的精子发生过程存在差异有关。因此,本试验通过比较分析四川白鹅和朗德鹅的睾丸组织结构和mRNA-lncRNA表达模式,初步探索四川白鹅和朗德鹅公鹅睾丸生精能力差异的分子机制。主要研究结果如下:1.朗德鹅的睾丸指数和曲精细管的长径
目的:本研究通过应用超高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱仪(UPLC-HRTOF-MS)检测轮状病毒感染患者与体检健康者的血清代谢物,通过比对分析筛选差异性代谢产物和异常代谢通路,寻找能够诊断轮状病毒感染的潜在生物标志物。方法:选取2020年11月至2021年2月经湖南省人民医院诊断为轮状病毒感染的患者41例为实验组,及体检健康者37例为对照组,收集两组的空腹血清标本。应用UPLC-HRTOF-MS
随着城市化进程的加快,城市热岛效应日益加剧,其直接或间接地影响着城市生态环境和居民健康,而城市森林在改善城市热环境中发挥着重要作用,研究城市热环境与城市森林之间的关系,对于合理地规划建设城市森林进而减缓热岛效应和改善城市生态环境有重要意义。本文以成都市四环内城区为研究区,以Landsat 8和高分二号遥感影像为数据源,先采用单窗算法反演地表温度,分析了研究区的城市热岛效应现状,再从城市森林斑块、组
随着信息时代的到来,信息获取和信息通讯在信息技术领域变得越来越重要.同时,直觉模糊β-覆盖信息系统作为覆盖信息系统的推广在人工智能领域扮演着重要角色.在数学中,信息系统之间的通讯可被解释为信息系统之间的映射,而同态的概念又是研究信息系统之间通讯的工具.本文的研究内容分为两部分,第一部分研究直觉模糊β-覆盖信息系统间的同态.首先从映射的定义出发,根据Zadeh的扩张原理将模糊映射推广到直觉模糊映射,
犹豫直觉模糊集同时具备直觉模糊集与犹豫模糊集的优点,可以有效地处理决策者在决策过程中偏好不一致的问题.考虑到人们因心理偏好不同,在决策时对于评价值的支持强度也有所差异,所以引入了概率犹豫直觉模糊集,它在描述不确定信息时更加符合人们决策的实际情景.Szmidt于2012年提出熵测度的对偶形式—知识测度,其在刻画犹豫直觉模糊信息时表现得更为直观与灵活.本文主要研究犹豫直觉模糊集与概率犹豫直觉模糊集的知
谱理论是算子理论算子代数中的一个重要分支,它与其他学科有着密切的联系,在物理学、量子力学等学科中的应用非常广泛.谱理论中的Weyl型定理问题,近年来备受关注,关于该问题以及相关问题的研究成了谱理论中的热点问题.本文在已有的理论基础之上,运用算子的一致可逆性质定义了新谱集,给出算子T的Weyl型定理不同的判定方法,并讨论了算子T∈HC(H)与a-isoloid算子T满足a-Weyl定理之间的关系.全
在数值计算、线性控制理论以及矩阵论等学科中,对角占优矩阵都有着非常重要的价值.并且在解线性方程组Ax=b时,常常要对系数矩阵A的无穷范数或者谱半径进行估计.近些年来,许多的数学家已经对一些特殊的对角占优矩阵进行研究并得到了许多重要的结论.本文将在这些已有结论的基础上,对广义严格双对角占优矩阵的逆矩阵的谱半径的下界进行估计,并证明广义严格双对角占优矩阵的三角-Schur补是严格对角占优矩阵(阶数大于
目的:检测膀胱癌组织中程序性死亡蛋白-1(Programmed cell death protein 1,PD-1)、成纤维细胞生长因子受体3(Fibroblast growth factor receptor 3,FGFR3)蛋白表达情况,联合患者术前预后营养指数(Prognostic nutritional index,PNI)水平,分析根治性膀胱切除患者术后临床结局的影响因素,对膀胱癌患者术