论文部分内容阅读
皮肤创伤愈合是一个异常复杂的过程,有多种修复细胞、炎症细胞及细胞因子参与。这些细胞和细胞因子之间有着复杂的调控关系。它涉及细胞运动、粘附、通讯、增殖和分化等细胞生物学的多个方面。然而创伤愈合又是一个十分有序的过程,在机体精确的调控下,修复过程有条不紊的进行。近年研究表明,多种干细胞对创伤的修复起到关键的作用,特别是表皮干细胞被认为是皮肤及其附属器修复的源泉细胞。因此,阐明其分化、迁移的调控机制是实现创面完美愈合的关键,也是表皮干细胞走向临床的关键。 过去研究发现,感觉神经末梢分泌的感觉神经肽类物质（如P物质、CGRP等）可以促进伤口愈合,其机制可能和启动神经源性炎症反应、调控免疫细胞功能、促使修复细胞增殖等有关。前期实验发现,在正常皮肤伤口愈合过程中,外源性神经肽P物质（substance P,SP）可以促进大量表皮干细胞募集于的创缘及肉芽组织中,加速伤口愈合。在此基础上,为进一步验证P物质促进表皮干细胞向肉芽组织中募集这一重要发现,本研究首先利用β1整合素、K19、K15等干细胞标记物以及干细胞慢周期性的特点（Brdu标记）,分别在体观察了正常皮肤伤口愈合过程中SP组（伤口给予外源性SP）、辣椒素组（采用特异性感觉神经毒性药物辣椒素（capsaicin）皮下预注射化学性除去感觉神经从而阻止神经肽分泌）、对照组肉芽组织中表皮干细胞分布特点;其次,糖尿病患者皮肤存在周围末梢神经的损伤和神经肽含量的下降,这是否会导致糖尿病皮肤伤口创缘表皮干细胞募集不足,继发伤口难愈?为验证此猜想,我们在糖尿病大鼠——这一“先天性皮肤感觉神经肽匮乏”模型上先观察了糖尿病大鼠患病不同时期皮肤基底层表皮干细胞变化趋势;继而在糖尿病大鼠难愈伤口模型上观察了外源性SP对表皮干细胞募集、迁移的诱导作用。 为深入研究P物质和表皮干细胞分化的关系,本实验首先在体外成功培养表皮干细胞,在此基础上利用免疫细胞化学技术和RT-PCR技术,分别从蛋白和mRNA两个水平检测离体培养表皮干细胞上是否存在SP特异性受体（NK-1R,NK-2R）及其mRNA表达;之后在细胞培养过程中加入SP和不同受体阻断剂,利用α6整合素和CD71两种标