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目的:采用自体血注入方法建立大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)模型,观察局部应用重组水蛭素(Recombinant Hirudin,RH)对ICH的治疗作用,并初步探讨其机制,为RH治疗ICH提供理论依据。
方法:成年雄性SD大鼠随机分为4组:正常组(Nor组,n=12),生理盐水对照组(NS组,n=42),模型对照组(ICH组,n=42)和水蛭素治疗组(RH组,n=42)。采用自体血注入大鼠尾状核方法建立脑出血模型。应用于--湿重法观察48h时间点脑水肿变化;通过HE染色观察6h;12h;24h;48h;72h;7d血肿周围组织病理改变,免疫组织化学法检测各组血肿周围脑组织Bcl-2、Bax蛋白表达。
结果:
(1)HE染色Nor组与NS组大鼠右侧基底节区细胞形态结构完整。ICH组血肿周围神经元数目明显减少,排列紊乱,组织水肿明显,细胞形态不完整,可见大量炎性细胞浸润。RH组与同时相点ICH组比较,血肿周围水肿带缩小,炎症细胞浸润程度减轻。 (2)脑水肿测定Nor组与NS组比较脑含水量无明显差异(P>0.05):ICH组和RH组脑含水量与NS组比较存在明显水肿P<0.05;而RH组与ICH组比较水肿明显减轻(P<0.01)。
(3)免疫组织化学Nor组右侧基底节区未见Bax、Bcl-2阳性细胞表达;NS组进针点周围Bcl-2偶见表达,各时间点差异无统计学意义(P>0.05),而Bax未见表达;ICH组和RH组Bax、Bcl-2均以出血灶周围表达为主,阳性细胞以胞浆有棕黄色颗粒为特点;Bax出血后6h可见阳性细胞表达,24h达高峰,48h后逐渐减少;Bcl-2在12h可见明显表达,48h达高峰,7d时仍有表达。在12h;24h;48h;72h RH组与ICH组比较Bcl-2表达增强(均P<0.01),Bax表达降低(均P<0.01)。
结论:
(1)凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2参与了出血后脑损伤。
(2)局部应用RH可显著减轻脑出血后脑水肿,并可下调促凋亡蛋白Bax的表达、上调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,发挥脑出血后脑保护作用。