胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GIST)是多发于胃部和小肠的消化道间质肿瘤。约有80%-85%的GIST存在酪氨酸激酶受体KIT突变,另有7%左右的GIST存在PDGFRA突变。研究表明KIT及PDGFRA是治疗GIST的主要靶标。临床一线药物伊马替尼(Imatinib,IM)靶向抑制KIT及PDGFRA的激活在GIST的治疗中取得了很好疗效。然而,由于KIT和PDGFRA存在的高频点突变甚至是KIT表达丢失等情况,绝大部分GIST患者在用药两到三年后会对伊马替尼产生耐药性。尽管诸如舒尼替尼(Sunitinib,SU)和瑞戈非尼(Regorafenib)等二、三线药物的开发缓解了部分伊马替尼耐药性带来的窘迫,但是此类靶向KIT的抑制剂并不能解决由于KIT表达丢失而引发的GIST耐药性的问题。我们的前期研究表明,在KIT表达丢失的GIST中,JUN、PRKCQ和Hippo/YAP信号通路协同介导了cyclin D1的高表达,并且抑制cyclin D1的表达促使GIST细胞凋亡,显著抑制了其生长增殖。因而本文计划筛选能够靶向抑制cyclin D1的小分子药物并验证其对KIT表达丢失耐药性GIST生长增殖的影响。本研究主要通过Western Blotting、MTT生长测定、克隆形成、伤口愈合、Transwell侵袭、流式细胞术等实验筛选并分析了不同小分子药物包括靶向PI3K(LY294002)、m TOR(everolimus)、MAPK(U0126)、HSP90(17-AAG)、MDM2(Nutlin-3)、PLCγ(?609)、JAK(AG490)、SRC(PP1)和26S蛋白酶体(Bortezomib)对cyclin D1表达的影响及Bortezomib对KIT表达丢失的IM耐药性GIST的促凋亡抗增殖效应,并进一步深入阐释了其内在机理。结果表明:Bortezomib能够抑制Hippo信号通路的关键调控效应分子YAP的表达,下调cyclin D1的表达,诱导上调肿瘤抑制子p53和p21的表达,从而促使KIT表达丢失的GIST细胞的凋亡,阻滞了细胞周期,显著抑制了肿瘤细胞的增殖、转移和侵袭。这些结果进一步表明cyclin D1是KIT表达丢失耐药性GIST的新型治疗靶标,并提示Bortezomib在cyclin D1高表达的KIT丢失的GIST治疗中具有潜在的临床价值,为这类高度耐药性GIST的治疗提供新的思路。