巴斯德毕赤酵母表达重组人白细胞介素11生产工艺的优化

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重组人白细胞介素11(rhIL-11)在临床主要用于治疗化疗导致的血小板低下症。目前生产该产品的常规的技术平台是大肠杆菌融合蛋白表达生产系统,但该工艺技术存在操作复杂、成本较高等缺点。在日趋激烈的市场竞争面前,如何提高重组人白细胞介素11生产的技术水平、降低其生产成本显得十分紧迫而意义重大。本研究针对目前重组人白细胞介素11生产存在的问题,利用易操作、低成本的毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统,构建了表达rhIL-11的Pichia pastoris重组菌,并对巴斯德毕赤酵母表达重组人白细胞介素11的生产工艺进行了优化。利用这一重组菌,进一步研究了rhIL-11的生产工艺。通过摇瓶培养,对温度、pH和甲醇诱导浓度进行优化,确定了最佳的重组菌生长和蛋白表达条件。在此基础上进行了15L罐上培养的进一步研究,确定了上罐发酵对菌体生长和蛋白表达最为有利的诱导时机(起始菌浓OD600)、诱导时间、溶氧、培养基及甲醇诱导模式,优化后的发酵工艺与原有的控制方法相比较,发酵过程单位时间、单位体积内的目的蛋白的产出量提高了30~40%。为提高蛋白纯化收率,本论文对目的蛋白的高度纯化条件进行了研究。通过对层析填料、盐浓度、线流速和洗脱梯度的考察,优化后的工艺与原有方法相比较,在保证产品质量的基础上收率提高了约62.8%。最后,优化后的工艺还经过了3批的生产,最终批生产量提高了90.7%。
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