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为了搞清楚河南省马铁菊头蝠的亚种分类地位,以及马铁菊头蝠种内的系统发育关系,本研究从3个方面对河南省的马铁菊头蝠进行了研究:一是形态学分析,来初步探讨该物种在河南省不同区系表型特征上的差异性;二是对马铁菊头蝠的消化系统进行观察,来了解其消化系统的组织结构;三是分子学分析,通过提取其DNA进行RFLP分析最后构建系统树,来评价其地方种群的遗传多样性水平和其之间的亲缘关系。
本研究从河南省的四大山系8个地区共采集到马铁菊头蝠标本58只,对其进行了组织解剖学观察;形态学测量分析;参照Genbank中吉林省和云南省马铁菊头蝠的细胞色素b基因序列,利用生物学分析软件进行分子分析,结果如下:
1.应用石蜡常规切片,HE染色,对马铁菊头蝠消化系统各器官的组织结构进行了观察,结果表明:食管粘膜上皮为复层扁平上皮,轻微角质化,前、中、后段的上皮结构没有显著差异,食管腺在前段较多,中、后段较少。胃固有层含有大量的管状腺。小肠粘膜表面有许多环形皱壁,在十二指肠上段粘膜下层,分布有十二指肠腺。大肠粘膜表面光滑,无绒毛,在粘膜下层的结缔组织中有小动脉、静脉和淋巴管。肝内结缔组织多,肝小叶分界较明显,肝血窦发达。胰的小叶间分界不明显。
2.对58只马铁菊头蝠的形态学数据进行主成份分析,再以主成份值进行Q型系统聚类,结果表明,河南省四大山系8个地区的马铁菊头蝠之间在形态上没有明显的地理差异。
3.RFLP分析表明河南省四大山系8个地区的马铁菊头蝠之间无明显差别,只有Taq I产生了两种酶切类型。
4.形态学数据和分子序列构建的系统进化树表明:河南、云南样本之间的遗传分化程度较高,分别属于不同的亚种。河南的马铁菊头蝠与日本的马铁菊头蝠被划分在一个进化单元,应该属于马铁菊头蝠日本亚种(Rhinolophus ferrumequinum Nippon)。云南样本鉴定为马铁菊头蝠尼泊尔亚种(Rhinolophus ferrumequinum tragatus)。