【摘 要】
：
目的：利用Tet-on真核表达系统,建立DOX诱导可调控表达Osterix小鼠前成肌细胞C2C12株,并探究成骨相关转录因子Osterix的生物学功能并为进一步研究Osterix的下游基因提供有效的细胞模型。方法：PCR方法扩增得到Osterix片段并插入应答质粒pTRE中,构建pTRE-Osx重组质粒；用G418和Hyg B分步筛选建立C2C12-pTet-pTRE-Osx和C2C12-pTet
论文部分内容阅读
目的：利用Tet-on真核表达系统,建立DOX诱导可调控表达Osterix小鼠前成肌细胞C2C12株,并探究成骨相关转录因子Osterix的生物学功能并为进一步研究Osterix的下游基因提供有效的细胞模型。方法：PCR方法扩增得到Osterix片段并插入应答质粒pTRE中,构建pTRE-Osx重组质粒；用G418和Hyg B分步筛选建立C2C12-pTet-pTRE-Osx和C2C12-pTet-pTRE细胞株；qPCR方法摸索诱导剂DOX的最佳诱导剂量和诱导时间；MTT法检测细胞增殖情况；流式细胞术检测细胞周期；钙钴法染色和茜素红染色检测成骨分化；qPCR检测成骨分化早期标志基因和其他相关基因mRNA水平的表达情况。结果：成功构建pTRE-Osx重组质粒和C2C12-pTet-pTRE-Osx和C2C12-pTet-pTRE细胞株；DOX诱导剂量为14μg／mL时Osterix的表达量最高,DOX诱导1h时Osterix的表达量开始增加,诱导18h时Osterix的表达量最大；MTT实验表明DOX诱导C2C12-pTet-pTRE-Osx细胞组与对照组相比,其细胞增殖受到抑制；流式细胞术检测细胞周期结果表明DOX诱导C2C12-pTet-pTRE-Osx细胞组细胞周期被阻滞在S期；钙钻法染色和茜素红染色发现C2C12-pTet-pTRE-Osx染色较空白对照组差异不明显；qPCR结果表明DOX诱导组成骨分化早期标志性蛋白基因表达均上调,Wnt信号通路拮抗物DKK1表达上调,与Osterix表达有关的Pitx2表达下调。结论：本论文成功构建在前成肌细胞C2C12中可诱导调控表达Osterix的细胞模型C2C12-pTet-pTRE-Osx,在C2C12细胞中Osterix具有抑制细胞增殖和促前成肌细胞向成骨方向分化的生物学作用。
其他文献
图的着色理论在图论中占有重要地位．本文研究图的条件着色和动态着色，条件着色和动态着色都是近几年引入并进行研究的．设k>0，r>0，k，r∈Z，图G的一个（k，r）-着色是一个映射c：V（G）（?）C（k） = {1, 2,..., k}，满足：（1）如果uv∈E（G），那么c（u）≠c（v），（2）对于任意v∈V（G），|c（N（v））|≥min{r，dG（v）}．可以正常（k，r）-着色的最小k
鳜鱼（Chinese perch,Siniperca chuatsi）俗称鳜花鱼、季花鱼、桂花鱼、桂鱼、鯚鱼,属鲈形目,鮨科,鳜亚科,鳜属（Basilewsky）。鳜鱼广泛分布于中国东部平原的江河湖泊。分离鳜鱼脑组织,提取并纯化脑总RNA,通过逆转录—聚合酶链式反应（RT-PCR）分别扩增出NPY基因cDNA核心片段,并应用3’RACE和5’RACE扩增NPY基因cDNA 3’末端及5’末端,最后
瘦素（leptin）是肥胖基因的产物,属于Ⅰ型细胞因子。在哺乳动物中,leptin主要由脂肪细胞合成与分泌,是调控摄食、能量代谢和繁殖等生理过程的重要激素。然而,leptin在鱼类中的生理功能目前仍不清楚。本研究以草鱼为实验模型,成功分离了草鱼leptin基因的全长cDNA序列、内含子序列及5’调控区序列。通过原核表达系统重组表达并纯化了草鱼leptin蛋白,应用腹腔注射法研究了重组草鱼lepti
目的研究β2肾上腺素受体激动剂莱克多巴胺（Ractopamine, RAC）给药1天和给药14天后,不同剂量和不同恢复时间对雄性成年大鼠睾丸波形蛋白（Vimentin, Vim）表达的影响,在分子水平探讨RAC对雄（男）性睾丸的影响及相关机制,以期为进一步研究β2肾上腺素受体激动剂对雄（男）性生殖系统的影响及食品安全提供实验依据。材料与方法1.实验动物及试剂实验动物均选取9-10周龄清洁级雄性Sp
本文利用亚纯函数的Nevanlinna值分布理论,研究了一类微分方程组解的存在性问题和分担一个值的整函数的唯一性问题.改进了Gundersen,YangLianzhong等人的一些结果.我们分四部分来阐述这些问题.第一章主要介绍Nevanlinna值分布理论的基础知识,常用记号和一些基本定理以及与分担值有关的一类相关知识.第二章证明了在一定条件下,方程组（?）,（其中Q为多项式,且次数为q,n>q
雨生血球藻隶属绿藻门（Chlorophata）、绿藻纲（Chloro-phyceae）、团藻目（VolvocaleS）、血球藻科（Haematococcaceae）、血球藻属（Haematococcus）,是一种微型单细胞淡水藻,能够在胁迫条件下产生虾青素,是自然界虾青素含量较高的一种经济微藻,具有较高的开发利用和研究价值。该论文以雨生血球藻CG-16株和CG-11株为实验材料,研究了4种培养基（
本文以从海南甘蔗渣中筛选的毛霉HN0512（Amylomyces.rouxii）为实验材料,经初步鉴定其具备产纤维素酶的能力,在此基础上优化培养基,得到活性较高的粗酶（4.07IU/mg）。采用硫酸铵分级沉淀、HiprepTM desalting（26×10）、弱阴离子交换层析柱、HiTrap Q FF强阴离子交换柱层析分离纯化技术分离纯化出单一组分纤维素酶,经SDS-PAGE电泳分析表明该酶的相
基因打靶技术已经越来越受到研究工作者的青睐,该技术也逐渐走向成熟。但是,传统的基因打靶所依赖的同源重组仅仅是个10-6-10-5之间的低概率事件。近几年以来,本课题组已经建立起了以基因组中度重复序列rDNA的间隔序列作为靶位点的多位点基因打靶技术,成功得到转基因鳜鱼和重组奶牛细胞,将打靶效率提高了200-300倍。但是,该技术离高效打靶还差很远。依据近几年的研究进展,国内外有很多卓有成效的基因打靶
以杜氏盐藻（Dunaliella salina）为实验材料,用超声波细胞均质仪作为超声波发生装置,研究了超声波对杜氏盐藻的辐射刺激效应。设置了超声波作用时间、作用频次和作用时间间隔3组实验：第1组设超声波连续辐射2s、4s、8s、16s、32s、64s和128s7个辐射时间强度处理；第2组以64s和128 s为2个辐射时间强度,均分为辐射1次、2次、4次、8次和16次5个作用频次处理；第3组选择6
目的:黄曲霉毒素B1（AFB1）是一种具有强致癌性、致畸性和遗传毒性的物质,本研究所已经分离出一种产黄曲霉素解毒酶（ADTZ）的真菌E20,并对其进行基因克隆和重组表达,得到了重组黄曲霉毒素解毒酶（rADTZ）。rADTZ为一新发现的氧化酶,其一级序列与已知蛋白具有较低的同源性,对该酶的研究具有重要的理论和实践意义。实验室前期的工作成功将黄曲霉毒素解毒酶基因克隆到含有融合标签MBP的pMAL—C2