siRNA对宫颈癌Hela细胞HPV18型E6、E7基因干扰作用的研究

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目的 探讨siRNA(short interfering RNAs)对宫颈癌细胞人乳头状瘤病毒(HPV)18型E6、E7 mRNA表达的干扰作用。 方法 (1)采用体外转录方法合成HPV18E6、E7 siRNA(2)用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞活性[以(A)值表示],筛选出最合适转染浓度;通过阳离子脂质体将E6、E7 siRNA转染入靶细胞宫颈癌细胞系Hela细胞中,实验分为3组,转染E6siRNA组(转染E6 siRNA),转染E7siRNA组(转染E7 siRNA),设未转染细胞为对照组。采用RT-PCR技术分别检测转染后24、48、72h HeLa细胞中HPV18E6、E7 mRNA的表达。流式细胞仪检测细胞周期。 结果 (1)转染E6siRNA组细胞A值为0.57±0.05,转染E7siRNA组细胞A值为0.62±0.04,对照组为0.87±0.05,转染组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。转染E6siRNA组转染前E6 mRNA表达水平为0.63±0.04,转染后24、48、72h,其表达水平分别为0.53±0.04、0.46±0.02、0.56±0.03;(2)转染E7siRNA组转染前E7 mRNA的表达水平为0.66±0.03,转染后分别为0.60±0.05、0.52±0.04、0.59±0.02,转染E6、E7siRNA组各转染时间点分别与其转染前比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)转染E6siRNA组S期细胞平均DNA含量为(0±5.5)%,G2期细胞为(66.9±3.5)%;E7转染组S期细胞平均DNA含量为(5.6±4.2)%,G2期细胞为(47.2±0.5)%,E6、E7转染组各细胞周期分别与对照组[S期细胞为(39.4±0.4)%,G2期细胞为(1.4±1.2)%]比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论 宫颈癌Hela细胞中确实存在RNA干扰现象,HPV对外源性E6、E7 siRNA的干扰具有特异性。
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