目的:在果蝇表达系统中表达并获得高纯度的B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)。方法: PCR扩增获得B、C基因型乙型肝炎病毒X基因(分别为Xb及Xc),以AgeI及BglII位点将其克隆入果蝇表达载体pMT/BiP/V5/HisC,构建相应的重组表达载体。重组载体与筛选质粒pCoBlast以脂质体Cellfectine共转染果蝇S2细胞,25μg/ml Blasticidin筛选获得多克隆抗性细胞株。扩增细胞并以CuSO4诱导HBx蛋白表达,Western-Blot鉴定表达产物并确定最佳的蛋白表达时间和诱导浓度。大规模培养细胞并诱导表达,用两种方法纯化获得高纯度的B、C基因型HBx。结果: 1、成功构建了B、C基因型乙型肝炎病毒X基因的重组质粒pMT/BiP-Xb-His C和pMT/BiP-Xc-His C;2、获得稳定表达HBx融合蛋白的S2细胞株,确定了融合蛋白在S2细胞中表达的最佳时间是诱导后72h,适宜的CuSO4诱导浓度为500μM～1mM;3、获得纯度为84.59%和94.62%的HBx融合蛋白。结论: B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白在果蝇表达系统中成功表达,经大规模表达纯化获得高纯度的融合蛋白,为进一步探讨B、C基因型HBx结构和功能差异奠定了基础。