松落针病是一种松树上严重的叶部病害,自1927年朱美凤首次报导马尾松上由松针散斑壳(Lophodermium pinastri)引起的落针病以来,众多学者普遍认为松针散斑壳(L.p)即松落针病的病原。本研究以二郎山松树上的松针散斑壳(L.p)为研究对象,通过扩增病原菌核糖体ITS(internal transcribed spacer)基因区段,设计特异性引物,在落针病表现症状引起危害前,采用常规PCR方法扩增病原菌将其检测出,为后续防治工作提供依据。试验前期于2008年7-8月在四川泸定二郎山林场人工松林采集已经发病的松针,采用子囊果组织分离法,分得松针散斑壳(L.p)作为供试菌株,并扩增其ITS区域,经NCBI比对确认后,以此序列为标准设计特异引物。共设计特异性引物24对,筛选出最优引物一条,编号5-3,序列为：F(5’-3’):5-AAGAATACAGGCTTCACG-3 18bp R(5’-3’):5-GGTCAACCTTGTATGGTG-3 18bp本试验共比较7种总DNA提取方法,包括核沉淀法、改良核沉淀法、二次沉淀法、CTAB法、高盐低pH法、氯化苄法、尿素提取法,发现核沉淀法和改良核沉淀法提取总DNA后的扩增效果最佳。同时优化了检测体系的PCR反应条件,发现引物的最佳退火温度应在50℃-54℃,引物浓度0.2μL(10mM),模板DNA1μL(约20-30ng)为反应的最佳浓度。在检测过程中于2009年3月之前都没能检测到松针散斑壳(L.p)存在,自2009年3月(包括3月)之后就能明显的检测到,但是只在松针的尖部和中部检测到了松针散斑壳(L.p),在基部没有发现。将每月经琼脂糖电泳检测后的PCR产物(48个)和琼脂糖胶回收产物(27个)送上海生工生物工程技术服务有限公司测序,测序结果经NCBI比对均为松针散斑壳(L.p)。试验结果表明利用病原菌的ITS区设计特异引物,用PCR的方法来检测尚处于潜伏期的松针散斑壳(L.p)行之有效,因为ITS区在种内不同菌株间高度保守而且存在着丰富的变化,足以针对某一种真菌设计特异引物,且由于特异性高,松树和其他真菌的DNA不会随着一起扩增,很容易在松树发病前将其检测出来。针对松针散斑壳(L.p),用本试验方法在松树发病前约两个月的时候,特别是在松针看起来正常,刚出现褐色小斑点的时就能将其检测出来,此时若集中烧毁松林内落地病针以减少初侵染源,并加强水肥管理辅以施用杀菌剂如石硫合剂、多菌灵等,便能很好的阻止松针散斑壳(L.p)的发育和传播,取得良好的防治效果。